中华人民共和国国家标准
GB/T32121-2015
牙膏中4-氨甲基环己甲酸（凝血酸）的 测定高效液相色谱串联质谱法
Determination of 4-(aminomethyl) cyclohexanecarboxylic acid(tranexamic acid）in toothpaste-HPLC-MS/MS
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
请注意，本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任.
本标准由中国轻工业联合会提出.
本标准起草单位：大连市产品质量监督检验所（国家日化产品质量监督检验中心）、大连标准检测技术研究中心.
本标准主要起草人：毛希琴、郑顺利、胡侠、任国杰、李春玲、董广斌.
牙膏中4-氨甲基环己甲酸（凝血酸）的 测定高效液相色谱串联质谱法
1范围
本标准适用于牙膏中4-氨甲基环己甲酸（凝血酸）的测定. 本标准规定了牙膏中4-氨甲基环已甲酸（凝血酸）的测定方法高效液相色谱串联质谱法本标准方法检出限：0.3μg/g；定量下限：1.0μg/g.
2规范性引用文件
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GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法要点
与3%甲酸水溶液混合后酸性条件下过强阳离子固相萃取小柱，1.5%甲酸水溶液淋洗柱床，20%甲醇水 牙膏先用水溶液分散，然后加人二氯甲烷，涡旋离心去除固形物及大部分的表面活性剂后，上清液溶液（含2%氨水）洗脱目标物，洗脱液经3%甲酸水溶液中和并定容后，由液相色谱分离，申联质谱法测定，标准曲线外标法定量.因目标物在低浓度下不稳定，提取及固相萃取过程均需以乙二胺四乙酸（EDTA）二钠作为稳定剂进行保护.
4标准物质与试剂
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682的实验室用一级水.
4.1标准物质
表1标准物质信息
化合物名称 4-氨甲基环己甲酸英文名称 4aminomethyl eyelohexanecarboxylic acid tranexamic acid别名 氨甲环酸凝血酸止血环酸CAS 号 1197-18-8分子式 C;H; NO;
表1（续）
化合物名称 4-氨甲基环己甲酸分子结构式 NH分子量 157 21纯度 99 0%
4.2甲酸：色谱纯（配制色谱流动相使用）4.3甲醇：色谱纯（配制色谱流动相使用）4.4甲醇4.5甲酸4.6二氟甲烷4.7氨水（25%）4.8乙二胺四乙酸（EDTA）二钠4.91.5%甲酸水溶液
7.5mL甲酸（4.4）0.003 7gEDTA二钠（4.8)，加水溶解并定容至500mL.
4.103%甲酸水溶液
15 mL甲酸（4.4）0.003 7 g EDTA二钠（4.8)，加水溶解并定容至500 mL.
4.110.02mmol/LEDTA二钠水溶液
称取0.0037gEDTA二钠（4.8），加水溶解并定容至500mL.
4.1220%甲醇水溶液（含2%氨水）
10 mL氨水（4.7)100 m1.甲醇（4.4)0.003 7 g EDTA二钠（4.8)，加水溶解并定容至500 mL
4.13SCX（强阳离子）固相萃取小柱：200mg，3ml
预先分别用3mL甲醇（4.4）和3mL1.5%甲酸水溶液（4.9）处理后待用.
4.14标准贮备液（1mg/mL）
准确称取4-氨甲基环已甲酸标准物质各10.0mg用0.02mmol/LEDTA二钠水溶液（4.11）溶解定容至10.0mL，配置浓度为1mg/mL.的标准储备溶液于冰箱冷藏保存，保存期1个月.
4.15标准工作溶液
临用时用0.02mmol/L EDTA二钠水溶液（4.11）稀释成10pg/L 20μg/L 50μg/L，100μg/L.200μg/L系列浓度的标准工作溶液.
5仪器
5.1高效液相色谱串联四级杆质谱联用仪（ESI源）5.2分析天平：感量0.1mg.0.01mg5.3旋涡混合器5.4超声波清洗器5.5离心机：转速不低于5000r/min.容量10mL5.6移液枪或移液器
6试样制备
6.1提取
牙膏样品挤出约2cm，弃去，称取0.2g（精确至0.1mg）牙膏样品于10mL刻度试管中，加人4mLEDTA二钠水溶液（4.11）涡旋或超声至样品完全分散，然后加入3mL二氯甲烷（4.6），涡旋1min~2min，5000r/min离心10min.准确移取1mL上清液于5mL离心管中向离心管中加入1mL3%甲酸水溶液（4.10），超声混匀后（勿振荡，避免溶液产生泡沫）待进一步净化.
6.2净化
将待净化溶液小心加人预先处理好的SCX固相萃取小柱，用1mL1.5%甲酸水溶液（4.9）润洗离心管（勿刷烈震荡或涡旋，可适当超声，否则会因溶液泡沫而无法完全转移），润洗溶液也加入固相萃取小柱，待溶液通过固相萃取小柱后，用3mL1.5%甲酸水溶液（4.9）淋洗柱床，弃去流出溶液.洗脱目标物，收集洗脱溶液，用3%甲酸水溶液（4.10）中和并定容至4mL，涡旋混匀后待测. 然后在柱出口处放置5mL具塞刻度试管.继续向柱床加人3mL20%甲醇水溶液（含2%氨水）（4.12）
注：若待测液中目标物浓度高于500pg/mL-需稀释至适当浓度后再进行测试，
7测定
7.1色谱条件
色谱条件为：
a）色谱柱：SB-AQ色谱柱2.7m，3.0mm×100mm或相当者；b）流动相：15%甲醇水溶液（含0.1%甲酸）：c）流速：0.3mL/min; d）柱温：25℃；e）进样量：2pL
7.2质谱条件
质诺条件为：
a）电离方式：电喷雾电离，正离子模式，ESI（十）；b）雾化气：氮气，241.3kPa（35psi）；
