中华人民共和国国家标准
GB/T 35800-2018
化妆品中防腐剂已胖定和氯已定及 其盐类的测定高效液相色谱法
Determination of hexamidine chlorhexidine and their salts as preservatives incosmetics-High performance liquid chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由中国轻工业联合会提出.本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所. 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口本标准主要起草人：孟宪双、马强、白桦、张庆、肖海清、赵卫哲、孙雨婷、沈敏.
化妆品中防腐剂已胖定和氯已定及 其盐类的测定高效液相色谱法
1范围
本标准规定了化妆品中防腐剂已胖定和氯已定及其盐类的高效液相色谱测定方法.本标准适用于水剂、膏霜、香波、散粉和唇膏类化妆品中防腐剂已滕定和氯己定及其盐类的测定. 本标准的检出限和定量限：已胖定和氯已定及其盐类的检出限为0.002%，定量限为0.004%.
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样经溶剂提取、离心、微孔滤膜过滤后，用高效液相色谱测定，外标法定量液相色谱-质谱确认.
4试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯水为GB/T6682规定的一级水.4.1乙晴：色谱纯.4.2甲醇：色谱纯.4.3四氢呋喃. 4.4三氟乙酸.4.5氯化钠.4.6饱和氯化钠溶液：称取40g氯化钠（4.5），置于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，备用.4.7已脉定二（羟乙基磺酸）盐和氯已定的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量参见4.8己腺定和氯已定标准储备溶液（1000mg/L）：称取已定二（羟乙基磺酸）盐标准品（4.7）17.1mg 附录A中的表A.1，结构式参见附录A中的图A.1.（精确至0.1mg）至10mL容量瓶中.用水溶解并定容至刻度：称取氯己定标准品10.0mg（精确至0.1mg）至10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，均于4℃避光保存，可使用3个月.4.9已定和氯已定混合标准溶液：分别移取1mL已定和氯已定标准储备溶液（4.8）至10mL容量瓶中，用甲醇（4.2）定容至刻度，根据需要用甲醇（4.2）稀释成适宜浓度的混合标准工作溶液，于4℃
避光保存，可使用3个月.
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪（HPLC）：配有二极管阵列检测器.
GB/T 35800-2018
5.2液相色谱-质谱/质谱（1C-MS/MS）仪：配有电喷雾离子源（ESI）.5.3超声波水浴.5.4离心机：转速不低于5000r/min.5.5涡旋混合器.5.6分析天平：感量为0.0001g和0.001g. 5.7具塞聚四氟乙烯离心管：50mL.5.8微孔滤膜；0.45um，材质为尼龙，
6测定步骤
6.1样品处理
6.1.1水剂、膏霜、香波和散粉类样品
溶液（4.6），涡旋混合，再加人9mL水，涡旋混合后，以5000r/min离心10min，上清液转移至另一 称取0.5g（精确至0.001g）试样于50mL具塞聚四氟乙烯离心管（5.7）中，加人1mL饱和氯化钠50mL具塞聚四氟乙烯离心管中.试样残渣继续加人10mL甲醇（4.2），在超声波水浴（5.3）中超声提取20min，以5000r/min离心10min，合并上清液，经0.45μm微孔滤膜（5.8）过滤，供高效液相色谱测定.
6.1.2唇膏类样品
称取0.5g（精确至0.001g）试样于50mL具塞聚四氟乙烯离心管（5.7）中，加入2mL四氢呋喃（4.3），涡旋混合，再加入8mL水，涡旋混合后，以5000r/min离心10min，上清液转移至另一50mL具塞聚四氟乙烯离心管中.试样残渣继续加人10mL甲醇（4.2），在超声波水浴（5.3）中超声提取20min，以5000r/min离心10min-合并上清液，经0.45pm微孔滤膜（5.8）过滤，供高效液相色谱测定.
6.2测定条件
高效液相色谱测定条件如下：
a）色谱柱：XTerra MSC5μm，250mm×4.6mm（内径），或相当者； b）流动相：见表1；c）流速：1.0 mL/mind）柱温：30℃；e）检测波长：260nm；f）进样量：10pl.
表1流动相
步骤 时间/min 水（含0.1%三氟乙酸1/% 乙（含0.1%三氟乙酸1/%0 70 301 5 0 2 862 9 0 2 863 9.1 70 304 12.0 70 30
6.3标准曲线的绘制
用甲醇将己定和氯已定标准储备溶液逐级稀释得到浓度为0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/ml、到高进样测定，以色谱峰面积为横坐标，浓度为纵坐标作图，得到标准曲线回归方程.
己胖定和氯己定的液相色谱图参见附录B的图B.1.
6.4测定
按6.2测定条件对待测样液进行测定，如果检出己眯定和氯已定的色谱峰的保留时间与标准品相中存在相对应的目标分析物，外标法定量.待测试样中已滕定和氯已定及其盐类的响应值应在标准曲 一致，并且在扣除背景后的样品色谱图中，该物质的紫外吸收光谱图与标准品一致，则可初步认定样品线的线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析.必要时阳性样品需用液相色谱-质谱进行确认试验.确认试验参见附录C.
已胖定和氯己定的选择离子质量色谱图参见图C.1.
6.5空白试验
除不称取样品外均按上述测定条件和步骤进行.
7结果计算
结果按式（1）计算，计算结果保留两位小数（计算结果应扣除空白值）：
(1 )
式中：
W试样中被测已胖定和氯已定及其盐类的百分比含量（分别以已胖定和氯已定计），%：-从标准工作曲线上查出的试样中己腺定和氯已定的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；m试样的质量，单位为克（g）.
8检出限和定量限
已胖定和氯己定及其盐类的检出限为0.002%，定量限为0.004%.
9回收率和精密度
在添加浓度0.004%~0.3%范围内，已胖定和氯己定及其盐类的回收率在84.1%～99.7%之间，相对标准偏差为1.1%~7.8%.
10允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%.
