中华人民共和国国家标准
GB/T34782-2017
蜂胶中杨树胶的检测方法 高效液相色谱法
Method for the determination of poplar tree gum in propolisHigh performance liquid chromatography
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草
本标准由中华供销合作总社提出.
本标准由全国蜂产品标准化工作组（SAC/SWG2）归口.
本标准起草单位：浙江大学、中国蜂产品协会、农业部蜂产品质量监督检验测试中心（北京）、江山福赐德蜂业科技开发有限公司、厦门思健生物科技有限公司、上海沪郊蜂业联合社有限公司.
本标准主要起草人：胡福良、张翠平、郑火青、吕泽田、李熠、徐水荣、颜鉴翔、孙德官.
引言
本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及到第4～9章与以水杨昔和邻苯二酚为指标鉴别杨树胶的原理及检测方法相关的专利（ZL201010180675.0和ZL201310721079.2）的使用.
本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场.
该专利持有人已向本文件的发布机构保证，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下，就专利授权许可进行谈判.该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案.相关信息可以通过以下联系方式获得：
专利持有人：浙江大学.
地址：浙江省杭州市西湖区余杭塘路866号
请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任.
蜂胶中杨树胶的检测方法 高效液相色谱法
1范围
本标准规定了蜂胶中是否含有杨树胶的高效液相色谐鉴别方法的原理、试剂、材料、仪器、设备和试验方法.
本标准适用于蜂胶及蜂胶乙醇提取物中杨树胶的检测.
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
工蜂采集树脂等植物分泌物与其上额腺、蜡腺分泌物等混合形成的胶粘性物质.
3.2蜂胶乙醇提取物ethanolextracted propolis
乙醇萃取蜂胶后得到的物质.
杨树型蜂胶poplar typepropolis
杨属（Populus）为主要植物来源的蜂胶
4原理
水杨苷和邻苯二酚广泛存在于杨属和柳属植物的芽、叶子和树皮中.当这些芽、叶子和树皮经过煎煮之后，水杨苷和邻苯二酚依然存在.面蜂胶中并不存在水杨苷和邻苯二酚，因此可以作为蜂胶中是否 掺有杨树胶的鉴别指标.
试样经75%乙醇提取后，用配有紫外检测器的高效液相色谱仅在213nm处检测水杨苷和邻苯二酚的含量，从而判断蜂胶中是否含有杨树胶.
5试剂和材料
实验室用水应符合GB/T6682规定的一级水，除非另有规定，试剂均为分析纯.5.1甲醇：色谱纯. 5.2乙晴：色谱纯.5.3乙醇.5.4磷酸.5.5水杨苷标准品：纯度≥98%.5.6邻苯二酚标准品：纯度≥99% 5.70.5%磷酸（5.4）溶液：量取5mL磷酸，用水定容至1L.5.8标准贮备液：准确称取水杨甘（5.5）和邻苯二酚标准品（5.6）各10mg，分别用甲醇溶液（5.1）配制成1.0mg/mL的标准溶液，于4C冰箱保存，保持期3个月.5.9标准工作液：分别吸取适量的水杨昔和邻苯二酚标准贮备液（5.8），用甲醇溶液（5.1）分别稀释成水酚浓度为 0.005mg/mL0.01mg/mL0.02mg/mL 0.04mg/mL和 0.06 mg/mL五个浓度，现用现配. 杨苷浓度为 0.005mg/mL0.01mg/mL、0.02mg/mL、0.04mg/mL 和0.06mg/mL五个浓度，邻苯二5.10滤膜：0.45pm，有机系.
6仪器和设备
6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器.6.2粉碎机.6.3旋转蒸发仪.6.4超声波清洗器.
7样品的取样及预处理
从被检样品的不同部位均匀取样50g，冷冻，粉碎，混匀，作为备检样品.
8试验方法
8.1供试样品溶液的制备
称取2g蜂胶试样，用75%乙醇超声波提取30min，料液比为1：15（质量体积），反复提取3次，合并滤液离心过滤后旋转蒸发浓缩，或者称取1g蜂胶乙醇提取物试样然后用75%乙醇超声溶解定容至50mL，取上清液.0.45μm滤膜过滤，供液相色谱测定.
8.2色谱条件
色谱柱：SepaxHP-C，柱长150mm，内径4.6mm，粒度5pm:或性能相当的色谱柱.流动相流速：1mL/min.梯度洗脱，洗脱程序参见附录A中表A.1.检测波长：213nm. 柱温：30℃
