团 体标 准
T/CCP1A 289-2026
金银花胡萝下微管蚜抗药性监测技术规程
Technical code of practice for insecticide resistance monitoring in Semiaphis heraclei
(Takahashi)
中国农药工业协会 发布
前言
起草. 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由中国农药工业协会提出并归口.
本文件起草单位：中国医学科学院药用植物研究所、中国农业大学、中国农业科学院植物保护研究所、江苏康缘生态农业发展有限公司.
会军、徐荣、赵士文. 本文件主要起草人：魏红爽、郭昆、徐常青、刘赛、谭树乾、乔海莉、郑永权、潘兴鲁、高功、高
金银花胡萝下微管蚜抗药性监测技术规程
1范围
本文件规定了金银花上胡萝卜微管蚜[Semiaphis heraclei（Takahashi）]抗药性的监测方法、抗药性水平评估及监测档案管理.
本文件适用于胡萝卜微管蚜对常用杀虫剂的抗药性监测.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T1154.6农药室内生物测定试验准则第6部分：杀虫活性试验浸虫法 NY/T1154.8农药室内生物测定试验准则第8部分：滤纸药膜法NY/T2726小麦蚜虫抗药性技术规程NY/T1667.3农药登记管理术语第3部分：农药药效
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3. 1
玻璃管药膜法residualfilmmethodwithglasstube
将丙酮等溶剂均匀涂布到玻璃管内壁，使昆虫通过与玻璃管内壁接触的生物测定方法.[来源于NY/T1154. 8和INY/T 2726]
3. 2
叶片浸渍法pestdippingmethod
将带有供试昆虫的植物叶片浸渍在药液中，使昆虫通过接触药液和带毒叶片的生物测定的方法.[来源于NY/T 1154.6和INY/T 4181]
4试剂与材料
4.1监测对象
供试试虫：经室内饲养1代~2代、龄期一致胡萝卜微管蚜的无翅成蚜.供试植物：
4.2供试植物
未接触任何药剂处理的室内培育的金银花幼苗.
4.3试验药剂
试验药剂采用原药，并注明通用名、含量、生产厂家.
4.4试验试剂
TritonX-100：丙酮、二甲基亚矾、二甲基甲酰胺等（对于不易溶解的药剂，可添加其他助溶剂）：的试剂均为分析纯，水为蒸馏水.
5仪器设备
5.1试验仪器
体视显微镜：拥有8x和35x放大倍数. 人工气候培养箱：工作条件为光照周期16h：8h（光：暗）、温度（25土1）°C、相对湿度70%~80%.小型滚瓶机.
天平：分度值为0.01g和0.0001g.
5.2试验器材
移液器：容积5mL、1mL、100uL和20uL.塑料培养Ⅲ：直径9cm.玻璃烧杯：容量10mL、25mL、100mL和500mL.玻璃管：长9cm，内径1.8cm. 量筒：100mL和500mL.盆钵.
6试验步骤
6.1试材准备
6.1.1金银花苗的培育
剪取试验田里的金银花枝条，枝条末端剪成斜角（30度45度）切口，长度12cm~15cm，扦插入盆体中，放入人工气候培养箱里培育45d~65d后备用.
6.1.2试虫采集
选择田间具有代表性的金银花地块3块~5块，每块地按5点随机取样方法，采集生长发育较一致的胡萝下微管蚜的无翅成蚜，每地块采集蚜虫1000头以上，带回实验室，建立供试种群.
6.2试虫饲养
里饲养.无任何药剂接触条件下连续饲养1代2代，用于抗药性测定. 田间采集的金银花胡萝下微管蚜无翅成蚜转移到室内金银花扦插苗上饲养，放入人工气候培养箱
6.3药剂配制
用天平准确称取一定量的原药，用丙酮等有机溶剂溶解，配制成一定浓度的母液.用移液器吸取一定量的母液到玻璃烧杯中，用0.05%TritonX-100的水溶液按照等比梯度设置5-8个系列浓度.每个浓度的药液量不少于50mL.
6.4药剂处理
6.4.1玻璃管药膜法
用于测定.对照组用丙酮等溶剂的溶液处理.选择健康一致的无翅成蚜进行试验，每个制备好的药膜管 从配制好药液中吸取250uL加入到玻璃管中，立即用小型滚瓶机滚均，待丙酮等溶剂挥发后2h后放置蚜虫20头，每个处理重复4次，放入培养箱饲养.
6.4.2叶片浸渍法
将带有无翅成蚜金银花叶片，分别浸入配制好的不同浓度药液中，20s后取出晾干，叶柄用浸水的脱脂棉包裹保湿，放入铺有干净滤纸的培养皿里，在培养箱里饲养.按照配置好的浓度由低到高的顺序 重复上述操作.每个处理重复4次，每个重复有翅蚜不少于20头，设置不含药剂的处理作为空白对照.
7结果检查
7.1玻璃管药膜法
药剂在处理24h后，检查结果并记录蚜虫死亡情况，在体视显微镜下用毛笔轻触蚜虫无反应或有明显的中毒症状（不取食或抽搐等）则视为死亡.
7.2叶片浸渍法
药剂在处理24h后，检查结果并记录蚜虫死亡情况，在体视显微镜下用毛笔轻触蚜虫无反应或有明显的中毒症状（不取食或抽搐等）则视为死亡.
8数据统计与分析
8.1死亡率计算方法
验需重做：对照死亡率在10%~20%，应按公式（1）和（2）进行校正，计算结果均保留到小数点后2位. 根据检查数据，计算各处理的校正死亡率.若对照死亡率20%，试
式中：
P-死亡率，单位为百分率（%）：
N 表示处理总虫数，单位为头：
K- 表示死亡虫数，单位为头.
P= 100Ps P-Po . (2)
式中：
校正死亡率，单位为百分率（%）：Po-对照死亡率，单位为百分率（%）： P- 处理死亡率，单位为百分率（%）：
8.2回归方程和致死中浓度（LC）的计算方法
采用PoloPlus等统计软件进行数据统计分析，计算每种药剂的LC50或LD50及其95%置信限、斜率（b）及其标准误、卡方和自由度.
9抗药性水平的计算与评估
9.1金银花胡萝卜微管蚜对部分杀虫剂的相对敏感基线
参见附录A.
9.2抗药性倍数的计算
根据相对敏感基线和测试种群的LC值，按公式（3）计算测试种群的抗药性倍数.
式中：
RR-测试种群的抗药性倍数：
T-测试种群的LC
S-相对敏感种群的LC
9.3抗药性水平的评估
根据抗药性倍数的计算结果，按照表1中害虫抗药性水平的分级标准，对测试种群的抗药性水平做出评估.
表1害虫抗药性水平分级标准
抗药性水平分级 抗药性倍数（RR），倍低水平抗性 5. 0<RR≤10. 0
