中华人民共和国国家标准
GB 5009.185-2026
食品安全国家标准 食品中展青霉素的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准代替GB5009.185-2016（食品安全国家标准食品中展青霉素的测定》.
本标准与GB5009.185-2016相比，主要变化如下：
一修改了第一法和第二法的顺序及名称，调整第一法为液相色谱法，第二法为液相色谱-质谱/质 修改了标准的适用范围：谱法：一修改了固体、半固体样品的前处理方法.
食品安全国家标准
食品中展青霉素的测定
1范围
本标准规定了食品中展青霉素的测定方法.本标准适用于水果及其制品、果蔬汁类及其饮料和酒类中展青霉素含量的测定.
第一法液相色谱法
2原理
液体试样经乙晴提取，固体、半固体试样先用果胶酶预处理，再经乙酸乙酯提取，固相萃取柱净化，液相色谐-紫外检测器检测，外标法定量.
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1乙晴（CHCN)：色谱纯.3.1.2乙酸（CH COOH）.3.1.3丙三醇[CH（OH)CH（OH)CHOH].3.1.4甲醇（CHOH). 3.1.5乙晴（CHCN).3.1.6乙酸乙酯（CH COOCHCH）.3.1.7果胶酶（液体）：活性≥1500U/g.2℃C~6C避光保存.果胶酶固体请参照厂家说明书配制成果胶酶液体.
3.2试剂配制
3.2.11%乙酸溶液：量取10mL乙酸用水稀释至1000mL，混匀.3.2.210%丙三醇甲醇溶液：量取1mL丙三醇用甲醇稀释至10ml.混匀.
3.3标准品
展青霉素（CHOCAS号：149-29-1）：纯度≥99%的标准品或其溶液.
3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备液（100μg/mL）：准确称取10mg（精确至0.1mg）展青霉素标准品，用乙晴溶解并定容至100mL，混匀.用分光光度计进行浓度校准（参见附录A），一18C及以下温度条件密封避光保存，
有效期6个月.3.4.2标准使用液（1.00pg/mL）：吸取展青霉素标准储备液1.00mL，用1%乙酸溶液稀释并定容至100mL，混匀.2℃~6℃温度条件下密封避光保存，有效期3个月.3.4.3标准系列工作液：吸取标准使用液适量，用1%乙酸溶液配制成质量浓度分别为10.0ng/mL、50.0 ng/mL、100ng/mL、150ng/mL、250 ng/mL的标准系列工作液.临用现配.
3.5材料
3.5.1复合材料固相萃取柱（3g/5mL）：填料为碳-氧化铝、白炭黑复合材料：或相当者.3.5.2微孔滤膜：0.22pm有机相微孔滤膜.
4仪器和设备
4.1液相色诺仪：配紫外检测器.4.2匀浆机.4.4组织接碎机. 4.3高速粉碎机.4.5天平：感量为0.01g和0.1mg.4.6涡旋振荡器.4.7离心机；转速≥6 000r/min.4.9氮吹仪 4.8旋转蒸发仪.
5分析步骤
5.1试样制备与保存
5.1.1试样制备
检测用的样品量应大于1kg：当样品量不足1kg时，至少取同一批次的3个包装；缩分后取不低于0.5kg.其中，固体样品用高速粉碎机粉碎，半固体样品用组织捣碎机捣碎，液体样品用匀浆机匀浆. 注1：对于高黏度样品/柔韧性样品或高糖样品等特殊样品可以采取液氮或超低温冷冻等措施进行制样.注2：对于碳酸饮料或酒类等，可采取超声、搅或抽真空等措施脱气后混匀.注3：根据检验目的可按实际情况取样制备.
5.1.2试样保存
制备后混合均匀的试样均分至约100g的多个包装，储存于洁净的容器内，密封后根据样品性质置于2C~6℃或-18C及以下避光保存.
5.2试样提取及净化
5.2.1试样提取
5.2.1.1液体试样
称取4g试样（精确至0.01g）于容量瓶中，加入乙腾定容至25mL，混合均匀、在6000r/min条件下离心5min，待净化.
5.2.1.2固体、半固体试样
称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人10mL水与150pL果胶酶溶液混匀，室温下避光放置过夜后，准确加人15.0mL乙酸乙酯，涡旋混合5min，在6000r/min条件下离心5min，.收取2.0mL的1%乙酸溶液溶解残留物，再加人乙晴定容至10mL，混匀后待净化. 集乙酸乙酯层.再重复提取一次，合并提取液，在40C水浴中用旋转蒸发仪或氮吹仪浓缩至干，准确吸
5.2.2试样净化
移取至少9mL待净化液至复合材料固相萃取柱配套试管中，将复合材料固相萃取柱插人试管中，缓慢推动固相萃取柱使待净化液以2mL/min的流速缓慢通过填料，溶液全部通过填料后混匀净化 液.准确吸取5.0mL净化液，加人20gL乙酸和100pL10%丙三醇甲醇溶液，涡旋混匀后，在40℃下用氮气缓缓吹干.加人1.0mL1%乙酸溶液，涡旋30s溶解残渣，用0.22μm滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中以备进样.
注：不同厂商的净化柱，操作步骤可能略有不同，应按说明书操作.
5.3仪器参考条件
仪器参考条件如下：
a）色谱柱：C柱（填料为十八烷基硅烷键合硅胶颗粒，可兼容100%水相，150mm×4.6mm；3.0μm；或相当者）；b）流动相：A相为水，B相为色谱纯乙精：梯度洗脱程序见表1. c）流速：0.8mL/min;d）柱温：40℃；e）进样量：100gL；f）紫外检测器条件：检测波长为276nm.
表1梯度洗脱程序
时间 min 流动相A % 流动相B %0 95 513 9513.2 0 10015 0 10015.2 95 520 95 525 95 5
5.4标准曲线的制作
将标准系列工作溶液分别注人液相色谱仪中，测得相应的峰面积响应值.以标准系列工作溶液的浓度为横坐标，以相应色谱峰峰面积响应值为纵坐标，绘制标准曲线.标准溶液的液相色谱图参见附录B 中图B.1.
