NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T4841-2025
Determination of curcuminoids in feedsHigh performanceliquid chromatography
中华人民共和国农业农村部 发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则>的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由农业农村部畜牧兽医局提出.
本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口.
本文件起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所.
雪、史合群、赖克强. 本文件主要起草人：严华、樊霞、宋荣、杨梦瑞、曹林、贾钟、李阳、李兰、田静、徐思远、张祯吴、崔婕、陈
饲料中姜黄素的测定高效液相色谱法
1范围
本文件描述了饲料中姜黄素（姜黄素、脱甲氧基姜黄素和双脱甲氧基姜黄素）的高效液相色谱测定方法.
本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料和混合型何料添加剂中姜黄素的测定.
本文件配合饲料、浓缩饲料、精料补充料中姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素的检出限均为1.0mg/kg，定量限均为2.5mg/kg：添加剂预混合饲料、混合型饲料添加剂中姜黄素、脱甲氧基姜黄素、 双脱甲氧基姜黄素的检出限均为3mg/kg.定量限均为10mg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T20195动物饲料试样的制备
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
试样中的姜黄素用甲醇提取，高效液相色谱仅测定，外标法定量.
5试剂或材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂.5.1水：GB/T6682，一级.5.2甲醇：色谱纯.5.3乙晴：色谱纯，5.4磷酸二氢钾：优级纯. 5.5磷酸二氢钾溶液（50mmol/1）：称取磷酸二氢钾（5.4）6.804g.用水溶解，井定容至1000mL，混匀.5.6标准储备溶液（1mg/mL）：准确称取姜黄素（CurI，CAS号：458-37-7.纯度≥95%）、脱甲氧基姜黄素（Cur，CAS号：22608-11-3，纯度≥95%）、双脱甲氧基姜黄素（CurⅢ，CAS号：24939-16-0，纯度≥95%）标准品各50mg（精确至0.01mg）分别置于50mL棕色容量瓶中，用甲醇（5.2）溶解并定容，混匀.5.7混合标准中间溶液（50μg/mL）：准确移取标准储备溶液（5.6）各2.5mL于50mL.棕色容量瓶中， 于2℃～8C避光保存，有效期6个月.用甲醇（5.2）稀释并定容混匀.临用现配.5.8混合标准系列工作溶液：准确移取适量混合标准中间溶液（5.7）.用甲醇（5.2）稀释并定容，混匀，配制成浓度为 0. 1 μg/mL、0 5 μg/mL、1. 0 μg/mL2. 5 μg/mL、5 0 μg/mL、10. 0 μg/mL、25 0 μg/mL 的混合标准系列工作溶液，临用现配.
5.9微孔滤膜：0.45pm.有机系.
NY/T 4841-2025
6仪器设备
6.1高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外可见光检测器.
6.2分析天平：精度为0.01g、0.1mg和0.01mg.6.3超声清洗器.
7样品
按GB/T20195的规定制备试样，不少于200g，粉碎使其全部通过0.425mm孔径的分析筛，充分混匀，装人密闭容器中避光保存，备用.
8试验步骤
8.1试样溶液制备
平行做两份试验.称取配合饲料、浓缩饲料、精料补充料约2g（精确至0.01g），添加剂预混合饲料、混合型何料添加剂约0.5g（精确至0.1mg）于100mL具塞三角烧瓶中，准确加人50mL（V）甲醇（5.2）， 旋摇，超声提取20min，中间旋摇1次，静置，取上清液过0.45pm滤膜（5.9)，待测.
8.2液相色谱参考条件
液相色诺参考条件如下：
a）色谱柱：C柱，长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或性能相当者；b）柱温：40C； c）检测波长；420nm；d）流动相：磷酸二氢钾溶液（5.5）乙晴（5.3）=4555；e）流速：1.0mL/minf）进样量：10pl.
8.3测定
8.3.1标准系列溶液和试样溶液测定
在仅器的最佳条件下，分别取混合标准系列工作溶液（5.8）和试样溶液（8.1）上机测定.姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素混合标准溶液液相色谱图见附录A，
8.3.2定性
在相同试验条件下，试样溶液中待测物的保留时间应与标准系列工作溶液（质量浓度相当）中待测物的保留时间一致，其相对偏差在土2.5%之内.
8.3.3定量
以标准溶液中的被测组分的峰面积为纵坐标，标准溶液中被测组分的浓度为横坐标绘制标准曲线，其相关系数应不低于0.99.试样溶液中待测物的响应值应在标准曲线的线性范围内.如超出线性范围，应将试样溶液用甲醇稀释后重新测定.单点校准定量时，试样溶液中待测物的质量浓度与标准溶液质量浓度相差不超过30%.
9试验数据处理
试样中CurI、CurⅡ、CurⅢ的含量以质量分数w计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示.多点校准按公式（1）计算，单点校准按公式（2）计算.
式中：
一由标准曲线查得的试样溶液中待测物的质量浓度，单位为微克每毫升（pg/mL)；V 一试样溶液体积，单位为毫升（mL）；
