ICS11.020 C62 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5106-2019 登革热媒介蚊类DNA条形码鉴定方法 DNA barcoding identification of Dengue vector-mosquitoes 行业标准信息服务平台 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总署发布 SN/T5106-2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国福州海关. 本标准起草人：方义亮、张建庆、林醒忠、王宇平、黄恩炯、房长天、吴荣泉. 行业标准信息服务平台 SN/T5106-2019 登革热媒介蚊类DNA条形码鉴定方法 1范围 本标准规定了登革热媒介蚊类DNA条形码鉴定方法中DNA提取、基因的扩增及序列的比对分 析、结果判定等. 本标准适用于登革热媒介蚊类白纹伊蚊(Aedes albopictus)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)成虫、幼虫、 蛹、残肢不全等标本的DNA条形码鉴定. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T1876医学媒介生物标本采集、制作及保存规程 SN/T2752.4卫生检疫人员的自我防护规范第4部分：实验室人员 SN/T4278国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用 3方法原理 利用通用引物对线粒体DNA中的COI基因的特定片段进行扩增，PCR产物克隆或者直接测序 后，得到长度不少于500bp的有效序列.与本标准的标准序列进行比对，从而达到物种快速准确鉴定的 目的. 4鉴定程序 4.1准备 准信息 实验室需具备的设备和试剂参见附录A.实验室生物安全符合GB19489和SN/T2752.4的规 定；PCR防污染措施遵照WS/T230的要求. 配置电泳液TAE(1XTAE):将Tris碱242g 冰醋酸57.1mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100mL 定容至1L 用双蒸水稀释50倍. 4.2标本处理 4.2.1取样 标本样品经过冷冻或乙醚麻醉，死后取成批同种样品的单份标本、珍稀单份标本取对称一侧组织 (如单侧蚊足)置于灭菌的洁净1.5mL离心管留用，如长期不用需放置体积分数为90%以上乙醇 一20℃保存.标本的其它同种个体或者部分针插作为凭证标本. 1 ...
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