ICS65.020.01 B04 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3785-2020 葡萄扇叶病毒的定性检测 实时荧光PCR法 Qualitative detection of grapevine fanleaf virus-Real time fluorescence PCR method 2020-11-12发布 2021-04-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3785-2020 国农业食品营准 前 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 务平台 本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口 本标准起草单位：中国农业科学院果树研究所 食典通 本标准主要起草人：范旭东、董雅凤、张尊平、任装、君. I NY/T3785-2020 葡萄扇叶病毒的定性检测实时荧光PCR法 1范围 本标准规定了葡萄植株和离体繁殖材料中葡萄扇叶病毒的实时荧光PCR检测方法. 本标准适用于葡萄植株和离体繁殖材料中葡萄扇叶病毒的定性检测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 件，仅注期的版本适用于本文件. 凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括的修改单适 GB/T6682分析实验用水规格和试验方法 3缩略语 AN 下列缩略语适用于本文件 cDNA:互补脱氧核糖核酸 PCR:聚合酶链式反道 DNA:脱氧核糖核酸 M-MLV:莫洛尼白血病病毒(Moloney murine leukemine virus)反转泉酶 dNTPs:4种脱氧物5-三磷酸（包括dATP、dGTPd P.aCTP)混合液 DEPC:焦炭酸二酯 RNA:核糖核酸 Tag:水生栖热箱 RNase:核糖核酸酶) ARCH C Tris-HCI:盐酸三（系基）氨基甲烷 4原理 根据葡萄扇叶病毒分离物2A基因的特异性序列，设计对用葡萄扇叶病毒PCR检测的特异性 引物.首先利用反转录酶将RNA反转录成CNA再以CNA为模板进行实时荧光PCR反应，SYBR Green1荧光染料掺入DNA双链发射荧光信号而不入链中的染料分子不发射任何荧光信号，从而保 证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步.通过实时荧光PCR仪检测荧光信号，将其转换成扩增 曲线，并通过扩增曲线的数据来进行结果判定、 5仪器与设备 5.1实时荧光PCR检测仪. 5.2超微量紫外核酸蛋白检测仪. 5.3电子天平：感量为0.01g. 5.4高速冷冻离心机：转速在12000r/min以上. 5.5恒温金属浴. 5.6微量移液器：量程分别为0.1L~2.5L、0.5L~10rL、5L~20L、10rL~100uL、20L~ 200L、100L~1000Lo L ...
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