B 41 ICS 11.220
NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2962-2016
奶牛乳房炎乳汁中金黄色葡萄球菌、 凝固酶阴性葡萄球菌、无乳链球菌分 离鉴定方法 MethodsforisolationandidentificationofStaphylococcus aureus,coagulase-negativeStaphylococcusandStreptococcus agalactiaeinmilkfromdairycowwithmastitis
2016-10-26 发布2017-04-01实施
中华人民共和国农业部）发布
NY/T2962-2016
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。
本标准起草单位：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所。
本标准主要起草人：王旭荣、李宏胜、李建喜、杨峰、王学智、张世栋、李新圃、杨志强、王磊、罗金印。
NY/T 2962-2016
奶牛乳房炎乳汁中金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、 无乳链球菌分离鉴定方法
1范围 本标准规定了奶牛乳房炎乳汁中病原性金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、无乳链球菌的分离 和鉴定方法。
本标准适用于奶牛乳房炎（临）原菌诊断.所分离的病原菌可进一步
2规范性引用文件 立用是必不可少的。
凡是注日期的引用件日期的版本适用于本文 件。
凡是不注日期的引用义文件，其最新版本（包括的修改单）适用于 GB/T 6682分村实！
验室用水规格和试验方法 GB 19489实验室生物安全通用要求 3术语和定义A ESEARCH
R 下列术语未和定义 3.1 金黄色葡萄球菌 一种血浆凝固蕾为阳性的葡萄球是引起房炎的主要病原菌 之一。
3.2 凝固酶阴性葡萄球coagula negativeStaphylococus,CNS 一类血浆凝周固酵阴性兰氏染色为阳性的葡萄球菌，是皮膜的常居菌，常见的CNS 主要包括表皮葡萄球菌！
溶血南球菌、腐生葡萄球菌、路邓葡萄球菌葡萄球菌、产色葡萄球菌、鸡 葡萄球菌、沃氏葡萄球菌等20多 3.3 无乳链球菌Streptococusagalactiae 一种CAMP试验为阳性、革兰染色为阳性的B群链球菌，是引起奶牛乳房炎的主要病原菌之一。
3.4 CAMP试验CAMPtest CAMP是Christie，Atkins，Munch-Peterson等人名的缩写，因本试验是他们三人所创建。
CAMP 试验的原理是原来不溶血或溶血不明显的无乳链球菌，在有金黄色葡萄球菌产物存在时，呈明显的β型 溶血，可区分无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌。
在本标准中，用于无乳链球菌的鉴定。
3.5 nuc基因thermonuclease gene 耐热核酸酶是金黄色葡萄球菌的一种毒力因子，100℃作用15min不失去活性，一般由致病菌产 生。
nuc基因是编码耐热核酸酶的基因序列，在本标准中,uc基因用于金黄色葡萄球菌的PCR鉴定。
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NY/T 2962-2016 3.6 sip基因surface immunogenic protein gene sip蛋白是无乳链球菌的一种表面免疫相关蛋白，是暴露在菌体表面的一种具有黏附和定植作用的 因子。
sip基因是编码 sip蛋白的基因序列，基因序列保守。
在本标准中，sip 基因用于无乳链球菌的 PCR鉴定。
4采样前检查 4.1总则 在采集乳样前，首先对乳房外观和乳汁性状进行观察。
4.2临床型乳房炎的检查 临床型乳房炎的检查至少包括以下5个方面： a）乳房的大小、颜色、对称性和硬度； b）乳房是否有发红、肿胀和发热；触摸时奶牛是否有疼痛反应及有无外伤或瘘管； c）乳汁的气味和颜色； d）乳汁有无絮片、凝块； e）奶产量的变化。
4.3临床型乳房炎的判定 奶牛乳区出现红、肿、热、痛或乳汁性状改变（乳汁颜色改变，或乳汁呈水样或有絮状或有乳凝块或 血乳)等症状，则可判定为临床型乳房炎。
4.4隐性乳房炎的检查与判定 隐性乳房炎可参照NY/T2692的规定进行检验判定，也可用商品化的隐性乳房炎诊断试剂进行 检验判定。
5奶牛乳房炎病牛乳样的采集 5.1试剂与材料 乳样采集管：配制方法见A.1；生物冰袋或冰块。
5.2操作方法 先用温水清洗乳房，然后依次用0.2%新洁尔灭浸泡的脱脂棉或纱布、75%酒精棉擦拭消毒乳头。
每个乳头弃去初始2把～3把奶，然后按无菌操作规程分别采集每个乳室的乳样约5mL。
采集的乳样 保存于乳样采集管中，立即检验。
如需运输送检，在运输过程中加人生物冰袋或冰块使乳样温度保持在...
