NY
中华人民共和国农业行业标准
代替NY/T544-2015
NY/T544-2025
猪流行性腹泻诊断技术
Diagnostic techniques for porcine epidemic diarrhea
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
本文件代替NY/T544-2015《猪流行性腹泻诊断技术），与NY/T544-2015相比，除结构调整和编
辑性改动外，主要技术变化如下：
a）增加了样品采集与处理（见第7章）：
b）增加了间接免疫荧光法（见第10章）；
c）增加了实时荧光反转录-聚合酶链式反应（见第13章）：
d）更改了间接酶联免疫吸附试验（见第15章，2015年版的6.6）；
e）增加了综合判定（见第16章）；
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由农业农村部畜牧兽医局提出.
本文件起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、黑龙江八一农垦大学.
本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：
猪流行性腹泻诊断技术
1范围
本文件规定了猪流行性腹泻的临床诊断、样品采集与处理和实验室诊断方法的技术要求.本文件适用于猪流行性腹泻的诊断、监测.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB19489实验室生物安全通用要求
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4缩略谱
下列缩略语适用于本文件.CPE：细胞病变作用（Cytopathic effect）DAP1:4，6-二脉基-2苯基吲噪(4‘，6-diamidino-2-phenylindole)DIFA：直接免疫荧光法（Direct immunofluorescence assay) ELISA：酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay)FA:荧光抗体（FITC-labeled antibody)FITC：异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocyanate）IDIFA：间接免疫荧光法（Indirect immunofluorescence assay） PBS:磷酸盐缓冲液(Phosphate buffered saline)PED：猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea)PEDV:猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus)Real-time RT-PCR：实时荧光反转录、聚合酶链式反应（Real-time reverse transcription-polymerasechain reaction)
RT-PCR;反转录-聚合酶链式反应（Reverse transcription-polymerase chain reaction）
5临床诊断
5.1流行病学
5.1.1PED一年四季均可发生，主要发生在寒冷季节. 5.1.2不同日龄的猪均可感染，尤其是7日龄以内的哺乳仔猪，发病率和死亡率可高达100%.5.1.3病猪、带毒猪和隐性感染猪是主要传染源.5.1.4病毒通过粪-口途径、带毒母猪乳汁、胎盘、空气进行传播.病毒常存在于粪便中，污染环境、何料、饮水和用具等，
5.2临床症状
5.2.1病猪通常表现为呕吐多发生在吮乳或吃食后，吐出的胃内容物呈黄色或乳白色.伴随着水样腹泻，腹泻物呈黄色、灰色，或呈水样，顺肛门流出，沾污臀部及活动区域.
NY/T 544-2025
5.2.2哺乳仔猪表现脱水、眼窝下陷、行走蹦珊、精神沉郁、扎堆烯缩在母猪腹部、食欲减退或停食.5.2.3死淘与猪只日龄大小有关.7日龄以内哺乳仔猪在发生腹泻3d～4d后，常因严重脱水而死亡.5.2.4断奶仔猪、育肥猪症状较轻，表现精神不振、厌食，持续腹泻2d～3d后逐渐恢复正常，少数猪生5.2.5成年猪、母猪表现为厌食、一过性腹泻，少数表现为呕吐或流产. 长发育不良.
5.3病理变化
5.3.1肉眼可见的病理变化只限于小肠，可见小肠膨胀，肠壁变薄，外观明亮，肠管内有黄色或灰色液体或带有气体.5.3.2肠系膜充血及肠系膜淋巴结肿大.5.3.3组织学检查可见小肠绒毛细胞的空泡形成和脱落，肠绒毛萎缩、变短（见附录A中的图A.1)，绒5.3.4超微结构的变化，主要发生在肠细胞的胞浆，可见细胞器的减少，产生电子半透明区，微绒毛终末 毛高度与隐窝深度从正常的7：1降低为311.网消失.5.3.5小肠细胞变得扁平、脱落.在结肠也可见到细胞变化，但未见到脱落.
5.4结果判定
符合5.1且满足5.2或5.3的病例，可判为PED疑似病例.确诊应采集有典型临床症状猪只的粪便、小肠及其内容物进行实验室诊断.
6生物安全措施
进行猪流行性腹泻的诊断、检测时，如动物剖检、样品采集与处理、核酸处理等，按照GB19489的规定执行.
7样品采集与处理
7.1仪器设备
7.1.1手术刀、剪刀和锻子.7.1.2微量移液器及配套吸头.7.1.4组织匀浆器. 7.1.3振荡器.7.1.6冰箱（-20℃）. 7.1.5台式低温高速离心机.
7.2.10.02 mol/LpH7.2磷酸盐缓冲液（PBS)，配制方法按照附录B中的 B.1的规定执行.7.2.2青霉素(100 000 IU/L).7.2.3链霉素（100 000 μg/L).7.2.4医用防护服.7.2.5样品保存管（2mL.、25mL.、50 mL).7. 2.6离心管(2 mL、15 mL、50mL).
7.3.1粪便
选取临床症状典型的发病猪只，用灭菌注射器吸取其粪便1mL～2mL或轻轻挤压发病猪的腹部，从其肛门处采集1mL~2mL粪便，故人含等体积无菌PBS（含终浓度1000 IU/mL青霉素、1000μg/mL链霉素）的样品保存管中，于一20℃保存.
