QB
ICS 71.100.70分类号：Y42备案号：43649-2013
中华人民共和国轻工行业标准
QB/T4617-2013
化妆品中黄芩苷的测定 高效液相色谱法
Determination ofbaicalinincosmetics-High performance liquid chromatography
中华人民共和国工业和信息化部 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由中国轻工业联合会提出.本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口. 本标准起草单位：上海市质量监督检验技术研究院.本标准主要起草人：周泽琳、杨轶眉、顾宇翔、冯俊、王庆贺.
化妆品中黄芩苷的测定高效液相色谱法
1范围
本标准规定了用高效液相色谱法测定化妆品中黄芩苷的含量.本标准适用于水剂、乳剂化妆品中黄芩苷的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样经75%乙醇涡旋振荡、超声提取、离心沉淀、分离过滤、固相萃取（可选）去除杂质后，采用反相高效液相色谱分离，二极管阵列检测器检测，外标法定量.
4试剂和材料
除非另有规定，所用试剂均为分析纯.水为符合GB/T6682一2008规定的二级水.
4.5体积分数为0.1%的磷酸溶液.
4.6甲醇.
4.8黄芩苷：含量不小于95%，CAS号、分子式、相对分子质量和结构式参见附录A表A.1.
溶解并定容至刻度.此溶液1mL相当于0.200mg黄苓苷.该溶液棕色瓶于4C冰箱避光可保存7天.
4.11体积分数为5%的甲酸-甲醇溶液.4.13质量分数为1%的氢氧化钠溶液. 4.12氢氧化钠.
5仪器和设备
5.2分析天平：感量为0.1mg. 5.1高效液相色谱仪：与二极管阵列检测器联用，5.3分析天平：感量为0.01g.5.4棕色容量瓶：10mL、100mL和250mL.5.5具塞离心刻度试管：25mL或50mL.
QB/T 4617-2013
5.6超声振荡器.
5.7离心机：转不小于8000r/min
5.11氮吹装置.
5.12移液管或移液器：2mL和10ml.
6分析步骤
6.1样品处理
6.1.1提取
分析天平取样品1.00g（精确至0.01g）于具塞离心刻度试管（5.5）中，加入75%乙醇溶液（4.3）至近10.0mL，涡旋振荡1min， 30C水溶中超声提取20mm，冷却至室温后用75%乙醇溶液（4.3）补足至10.0mL，8000rmin高心分离5min，上清液经0.22um滤膜过滤.
6.1.2净化（当需要降低检出限或试样中存在对黄答苷检测有干扰的杂质时使用）
将阴离子交换固相萃取小柱（5.10）先用5mL甲醇和5mL水活化，然后取6.1.1步骤中离心后的样品上清液5mL加入本柱进行上样（细上请液较） 可提高离心速度或用滤膜过滤后再上样）.上样结束后用5ml甲醇（4.6）洗涤，然后用5%甲酸-甲醇溶液（4.11）5mL洗脱，收集洗脱液氮并吹干，用75%乙醇溶液（4.3）1mL定容并超声助溶，经0.22m滤膜过滤.上述过程 流速均应控制在1mL/min
6.2测定条件
高效液相色谱测定参考条件如下：
6.3标准工作曲线绘制
按6.2色谱条件检测.以标准系列溶液（0μg/mL、1μg/mL、 10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、100ug/mL) 的浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，进行线性回归得到标准曲线方程.
黄芩苷标准品的HPLC色谐图参见附录B中的图B.1.
6.4测定
按6.2的色谱条件，取6.11 步骤中（采用固相萃取取用6.1.2步骤中）的滤液进样，得到试样溶液的峰面积，概据保留时间和二极管阵列的光谱图定性，黄苓苷标准品的DAD光谱图参见附录B中的图B.2.从标准曲线上查得武样溶液中黄答苷的含量，若在相同保留时间出现干扰峰且无法用固相萃取去 化钠溶液（4.13）调节流动相的pH为2.5或3，黄苏苷的保留时间会相应提前，借此可判断样品中是否存在黄芩苷. 除时，可用1%签
试样溶液中黄芩音的响应值应在标准曲线线住范围内，超过线性范围则应将提取液稀释后测定或增加提取溶液的量重新检测.
6.5空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行.
QB/T 4617-2013
6.6平行试验
7结果计算
8检出限和定量限
下限分别为3.0mg/kg、10.0mg/kg 本方法黄芩苷的检出限、定量下限分别为10.0mgkg、30.0mgkg：使用图相萃取时检出限、定量
9回收率和精密度
样品在添加浓度为16mg/kg~82mg/kg的范围内，回收率在81.3%104.5%之间，租对标准偏差小于7%
10允许差
