准
化妆品舒缓功效测试 角质形成细胞白介素-8生成抑制法
Test of soothingefficacy for cosmetics-Method for inhibiting interleukin-8production of keratinocytes
浙江省健康产品化妆品行业协会 发布 出版
前言
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由浙江省食品药品检验研究院提出.
本文件由浙江省健康产品化妆品行业协会（ZHCA）归口.
本文件起草单位：浙江省食品药品检验研究院、广东博溪生物科技有限公司、珀莱雅化妆品股份有限公司、爱茉莉太平洋（上海）研发有限公司、高浪控股股份有限公司.
本文件主要起草人：桑晶、何立成、卢永波、冯潇、田超凡、徐行行.
化妆品舒缓功效测试 角质形成细胞白介素-8生成抑制法
1范围
本文件描述了化妆品舒缓功效的一种体外测试方法. 本文件适用于可均匀分散在溶液中的化妆品及原料的舒缓功效的测试.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
国标准出版社GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语及定义
下列术语和定义适用于本文件.
3.1
构成表皮基底层至角质层的主要
3.2
白介素-8interleukin-8：IL-8
巨噬细胞和上皮细胞等分泌的细胞因子.注1：白介素是白细胞及其他特殊细胞产生并在这些细胞间发挥调节作用的细胞因子.
注2：白介素-8是白介素的一种亚型.
舒缓soothing
有助于改善皮肤刺激等状态的功效.
4试验原理
反应的原理，即通过脂多糖诱导角质形成细胞表面TLR跨膜受体，激活NF-xB炎症信号传导通路从IL-8释放的水平来反应受试物的舒缓功效. 而下游释放系列炎症因子，如IL-8等，引发皮肤出现红斑、癌痒等症状的过程.通过计算受试物抑制
5试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水.
T/ZHCA 029-2024
5.2与角质形成细胞相适应的培养基及血清.5.3胰蛋白酶-EDTA溶液.5.4磷酸盐缓冲液（PBS）：pH7.2~7.4.5.5水，符合GB/T6682规定的三级水.5.6脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS），纯度≥99%，用水配成25mg/mL储备液，使用终浓度为5.7聚肌胞苷酸（Polyriboinosinic polyribocytidylic acid，PolyI:C)，纯度≥90%，用水配成10 mg/mL 60 μg/m1的溶液.储备液，使用终浓度为100μg/mL的溶液.5.8噻唑蓝（MTT)，纯度≥98%，临用新配成0.5mg/mL的MTT溶液.5.9二甲基亚（DMSO）.5.10人IL-8ELISA检测试剂盒（采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法）或其他IL-8检测试剂.5.11阳性对照物：地塞米松，纯度≥98%.用二甲基亚矾配成100mg/mL储备液，使用终浓度为5.12阴性对照组：分别加人聚肌胞苷酸和脂多糖于培养基中肌胞苷酸的终浓度为60μg/mL，脂多 100μg/mL的溶液.糖的终浓度为100μg/mL，作为阴性对照溶液.5.13阳性对照组：聚肌胞苷酸和脂多糖诱导液处理 加人终浓度为100μg/mL地塞米松溶液.5.14空白对照组：不加聚肌胞苷酸和脂多糖诱导的 ，其余操作与阴性对照组一致.
6仪器
6.3可调节移液器：最大量程为1000pL、200gL、20pL.6.4超净工作台.6.5水平低速离心机：转速大于或等于1000r/min.6.7细胞培养板振荡器.
6.2二氧化碳培养箱：37℃士1xO体积分数范围内（5±1）%，相对湿度≥95%.
6.6倒置显微镜：放大倍数至少为400或以上.
6.8酶标仪.
7试验步骤
7.1实验前准备
7.1.1受试物准备
受试物制备需要满足以下条件：
a）水溶性受试物直接采用培养基作为溶剂，水难溶的受试物采用二甲基亚（DMSO）作为溶剂：b）使用涡旋混合、超声处理或加热等方法辅助溶解配成溶液或均匀混悬液：d）受试物应临用新配. c）无法配成溶液或均匀混悬液的受试物不适用于本试验；
