中华人民共和国国家标准
GB 15193.30-2025
食品安全国家标准
神经发育毒性试验
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
食品安全国家标准 神经发育毒性试验
1范围
本标准适用于评价受试物的神经发育毒性作用. 本标准规定了神经发育毒性的基本试验方法和技术要求.
2术语和定义
2.1神经发育毒性
生命周期的任何阶段. 个体在发育过程中暴露于受试物后引起的神经系统结构和功能的异常改变，这种改变可以发生在
2.2母体毒性
受试物引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应，表现为增重减少、功能异常、中毒体征，甚至死亡等.
2.3未观察到有害作用剂量（NOAEL）
在规定的试验条件下，用现有的技术手段或检测指标，未观察到任何与外源化学物相关的有害作用的最大剂量或浓度.
2.4最小观察到有害作用剂量（LOAEL）
在规定的试验条件下，与适当的对照机体比较，外源化学物引起机体某种作用的最低剂量或浓度.
3试验目的和原理
将妊娠期和哺乳期的实验动物暴露于受试物，评价其子代神经毒性的试验.通常观察其神经系统结构和功能的改变，及神经行为的异常.该试验可评价受试物对F1代动物神经系统发育过程中功能 和/或形态学的潜在影响，确定受试物是否具有神经发育毒性及其NOAEL和/或LOAEL.
4位器和试剂
4.1仪器/器械
机、翻正反射仪、实验室常用解剖器械、电子天平、生物显微镜、检眼镜、血生化分析仪、血液分析仪、凝血 大鼠跳台仪、大鼠避暗仪、大鼠穿梭箱、大鼠Morris水速宫、音叉、前肢悬挂仪、热板仪、大鼠跑步分析仪、离心机、病理切片机等.
4.2试剂
甲醛、二甲苯、乙醇、苏木素、伊红、石蜡、血球分析仪稀释剂、血生化分析试剂、凝血分析试剂等.
5试验方法
5.1受试物
受试物应尽量使用原始样品，若不能使用原始样品，应按照GB15193.21对受试物进行适当处理.
5.2实验动物
5.2.1动物选择
选嗮齿类动物大鼠，避免选用生殖率低或发育缺陷发生率高的品系.本标准中的妊娠和哺乳天数均指 实验动物的选择应符合GB14922的有关规定，选择已有资料证明对受试物敏感的动物，一般首常用品系大鼠，如使用其他种属动物，应当选用相对应的天数，并根据相应的毒理学、毒代动力学和/或其他资料说明其合理性.实验动物应标明动物种属、品系、来源、实验动物的微生物级别、性别、体重和周龄.
5.2.2动物数量和性别
为了获得满足统计学要求的基本试验数据，正确地评价受试物对动物神经发育过程的毒性作用，需保证每个剂量组和对照组均至少获得20窝F1代动物.出生后（PostnatalDays，PND）4d内（出生当日为PND0)，进行窝标准化，按照随机原则剔除每窝多余F1代动物，使每窝F1代动物数量尽可能一致，且不应超过所选动物品系每窝F1代动物数量的平均数（8只～12只）.每窝F1代雌性和雄性动物数量尽可能一致.不能选择性地别除F1代动物，如不能按照体重的大小剔除F1代动物.正式试验 前，应确定哪些F1代动物用于断乳前试验，哪些用于断乳后试验.
5.2.3动物准备
使用健康、未经使用过的实验动物（合并试验除外），试验前，动物在实验动物房至少应进行3d～5d的环境适应和检疫观察.试验开始时动物体重的差异不应超过平均体重的土20%，且体重应 在该动物品系的正常值范围内.如购买的是妊娠动物，应保证其适应2d～3d.与同只雄性交配的孕鼠尽可能平均分配至各组，每一只动物进行唯一性标识.
5.2.4动物饲养环境
实验动物饲养条件、饮用水和饲料应符合GB14925、GB14924的有关规定.实验动物自由进食、饮水.交配应在适宜的笼具中进行，动物交配成功后，于妊娠期15d内转移至分娩笼或孕鼠笼单独喂 养，合理摆放笼具以减少位置影响.为临近分娩的孕体提供适当可筑窝的材料.动物孕期内应谨慎小心处置，避免流产，并减少噪声等外界因素刺激.
5.3剂量及分组
够诱导出一些母体毒性，如临床体征、体重增重下降（不超过10%）和/或靶器官毒性出现剂量-反应关 试验至少设3个剂量组和1个对照组.在受试物的理化和生物特性允许的条件下，最高剂量应能系等，但不引起动物死亡；中间剂量可引起轻微的毒性反应；低剂量应不引起任何毒性反应.剂量组间距以2倍～4倍为宜.如需增设第4个剂量组，可选择较大的组间距（如>10倍）.
5.4受试物给予
5.4.1掺入饲料或水
受试物掺入饲料或饮水给予时，要将受试物与饲料（或饮水）充分混匀并保证该受试物配制的稳定性和均一性，以不影响动物摄食、营养平衡和饮水量为原则.受试物掺入何料比例一般不超过5%（质量分数），最大不应超过10%，若超过5%且受试物无热量或营养成分，对照组饲料应添加甲基纤维素等，掺人量与高剂量组相同，使其与剂量组何料的营养素水平保持一致：也可根据受试物热量或营养成是每千克体重所摄入受试物毫克数或克数，即mg/kg体重或g/kg体重.当受试物掺人饲料时，其剂量 分的状况调整剂量组饲料的营养素水平，使其与对照组饲料的营养素水平保持一致，受试物剂量单位单位亦可表示为mg/kg饲料或g/kg饲料，掺人饮水则表示为mg/mL.水.当受试物掺人饲料或掺人饮水给予，要记录动物的摄食量和饮水量，试验结束时根据摄食量和饮水量计算受试物的实际摄人剂量.
5.4.2灌胃给予
受试物以滥胃方式给予时，要将受试物溶解或悬浮于合适的溶媒中.建议优先考虑使用水溶液或悬浮液，其次考虑使用植物油（如橄榄油、玉米油等）溶液或悬浮液，不溶于水或油的受试物亦可使用甲基纤维素、淀粉等配成混悬液或糊状物等.溶媒或为增强受试物溶解性添加的助溶媒应考虑以下儿点：是否影响受试物的吸收、分布、代谢和蓄积；是否影响受试物的化学特性，以致改变其毒性特征：是否潜在毒性的溶媒（如丙酮、二甲基亚矾）.受试物应现用现配，有资料表明其溶液或混悬液储存稳定者 影响动物对食物和水的消耗量及营养水平.另外，除水外必须清楚溶媒的毒性特征，避免使用本身具有除外.
受试物以滥胃方式给予，如溶媒为水时，灌胃体积一般不超过10mL/kg体重，最大滥胃体积不超过20mL/kg体重；如为油性液体，灌胃体积应不超过4mL/kg体重；各组动物滥胃体积应一致.每日行灌胃或其他处理. 应在同一时间滥胃，实验动物每周至少称重2次，根据体重调整灌胃体积.在分娩当天建议不对母体进
5.5试验方法
选用初成年期（PND60～70）未孕雌性、雄性大鼠作为F0代，避免发生近亲（同窝）交配.查见雌鼠阴栓和/或阴道涂片发现精子的当日确定为孕期（GestationDays，GD）第0d，F0代动物从受孕着床（GD6）到整个哺乳期（PND21），每日按设计染毒量给予其受试物.F1代断乳后，可对F0代雌性大鼠 进行大体解剖和脏器系数的检测.根据检测目的将雌、雄仔鼠分配至各评价队列中，各队列的检测时间、用于检测的仔鼠数量及检测指标等有下述3种方案，可选择其中1种方案.各方案见表1～表3.
表1每窝F1代动物的分组和检测指标（方案一）
同窝仔鼠编号 用于检测的仔鼠数量 检测指标雌20 只(10雌10) 40 只(20 雌十20 ) PND22脑质量、神经病理学、形态学 个体行为发育20 只（10 雌10) PND 22 脑质量
表1每窝F1代动物的分组和检测指标（方案一）（续）
网窝仔鼠编号用于检测的仔鼠数量 检测指标40 只（20雌十20排) 临床观察40只（20雌20排） 40 只(20 雌十20排) 运动能力 性成熟2 40 只（20雌20排) 感觉运动功能40 只（20雌十20排) PND 25学习记忆20 只（10雌10排） 40 只（20啡20排） PND70脑质量、神经病理学、形态学3 20 只（10雌10排） PND 70学习记忆 PND 70脑质量用于替换试验中出现问题或其他附加试验保留的动物此例中每窝剔除后保留4只雌性和4只雄性仔鼠；雌性仔鼠编号1~4；雄性仔鼠编号5~8.
表2每窝F1代动物的分组和检测指标（方案二）
同案仔鼠编号 用于检测的仔鼠数量 检测指标1 5 20 只（10雌10排） 40 只(20雌20排) 个体行为发育 PND11脑质量、神经病理学、形态学40 只(20雌十20排) 临床观察40只（20雌20排） 运动能力2 40只（20雌20排） 40 只(20雌十20排) 性成熟 感觉运动功能20 只(10 雌10排) PND70脑质量、神经病理学、形态学20 只(10雌10排) PND 23 学习记忆3 7 20 只(10雌10排) PND 70 学习记忆脑质量4 8 用于替换试验中出现问题或其他附加试验保留的动物此例中每窝剔除后保留4只雌性和4只雄性仔鼠：雌性仔鼠编号1~4：维性仔鼠编号5~8. PND23和PND70选择不同窝仔鼠进行学习记忆测试（例如根据奇偶数窝选择仔鼠进行学习记忆测试）.
表3每窝F1代动物的分组和检测指标（方案三）
网窝仔鼠编号 用于检测的仔鼠数量 检测指标堆 20 只（10 啡10排）1 5 20 只(10雌10排) PND11脑质量、神经病理学、形态学 PND 11 脑质量40 只（20雌十20排） 个体行为发育2 40只（20雌20排） 性成熟 运动能力40 只（20雌十20排） 40只（20啡十20排） PND 27学习记忆
