中华人民共和国国家标准
GB 23200.92-2016
代替SN/T2445-2010
食品安全国家标准 动物源性食品中五氯酚残留量的测定 液相色谱-质谱法
National food safety standards
Determination of pentachlorophenol residue in animal-derived foods
Liquid chromatography -mass spectrometry
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 中华人民共和国农业部 国家食品药品监督管理总局
发布
前言
法》. 本标准代替SN/T2445-2010《进出口动物源食品中五氯酚残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱本标准与SN/T2445-2010相比，主要变化如下：一标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式：一标准范围中增加“其它食品可参照执行”. ，，本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T .
食品安全国家标准
动物源食品中五氯酚残留量的测定液相色谱-质谱法
1范围
本标准规定了动物源食品中五氯酚残留量的制样、液相色谱-质谱测定方法. 本标准适用于猪肝、猪肾、猪肉、牛奶、鱼肉、虾、蟹等动物源食品中五氯酚残留的测定.其它食品可参照执行.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中的五氯酚残留用碱性乙水溶液提取，经MAX固相萃取柱净化，浓缩、定容后，用液相色谱一质谱仪检测和确证，外标法定量.
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1试剂
4.1.1甲醇（CHOH）：色谱纯.4.1.2乙晴（CHsCN）：色谱纯. 4.1.3三乙胺（CgHsN）.4.1.4甲酸（HCOOH）：色谱纯.4.1.6氨水（NHHO）. 4.1.5乙酸铵（CHCOONH4）.
4.2溶液配制
4.2.1乙晴-水溶液（73）：准确量取70mL乙晴和30mL水，混合摇匀.定容至刻度，混合均匀.均匀. 4.2.35%氨水溶液：量取200mL浓氨水（25%），转移入1000mL容量瓶，用水定容至刻度，混合4.2.44%甲酸甲醇溶液：量取10mL甲酸，转移入250mL容量瓶，用甲醇定容至刻度，混合均匀.4.2.52%甲酸甲醇水溶液：取一定量4%甲酸甲醇溶液与水等体积混合均匀.4.2.65mmol/L乙酸铵水溶液：准确称取0.3854g乙酸铵，溶于水中，转移到1000mL容量瓶中，定 容至刻度，混和均匀.
4.3标准品
4.3.1五氯酚钠标准品（Pentachlorophenol sodium salt，CAS号：131-52-2）：纯度≥94.5%，或相当.
4.4标准溶液配制
4.4.1标准储备溶液（200mg/L）：称量经折算相当于10mg（精确到0.1mg）五氯酚的标准品，用甲4.4.2标准工作溶液：标准工作溶液根据需要使用前用空白样品基质溶液配制.保存于4C冰箱内. 醇溶解并定容至50mL棕色容量瓶中.此储备液可在-18C以下避光存放12个月.
4.5材料
5仅器和设备
5.1液相色谱串联四极杆质谱仪：配电喷雾离子源.5.2分析天平：感量0.01g和0.0001g. 5.3旋涡混合器.5.4离心机，5000r/min.5.6机械真空泵.5.7组织捣碎机.5.9超声波仪. 5.8均质器.5.10吹氮浓缩仪.
5.5固相萃取真空装置.
6试样制备与保存
6.1试样制备
制样操作过程中必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.
6.1.1动物肌肉、肝脏、肾脏、鱼肉、虾和蟹
从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记.
6.1.2牛奶样品
从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记.
注：以上样品取样部位按GB2763附录A扶行.
6.2试样保存
样品于-18℃以下冷冻保存.
7分析步骤
7.1提取
7.1.1肌肉、鱼肉、肝脏、肾脏、虾和蟹
称取均质试样2g（精确到0.01g），置于10mL具螺旋盖聚丙烯离心管中，加入6mL5%三乙胺的乙-水溶液.肌肉和鱼肉样品均质提取2min：肝脏、肾脏、虾和盤样品旋涡混合1min，超声提取5min.3000r/min离心5min，收集上清液于一具刻度离心管中.离心后的残渣用约6mL5%三乙胺的乙- 水溶液重复上述提取步骤1次，合并上清液，混匀.
7.1.2牛奶
称取均质试样2g（精确到0.01g），置于10mL具刻度螺旋盖聚丙烯离心管中，加入10mL5%三乙胺的乙-水溶液，旋涡混合1min，超声提取5min，5000r/min离心5min，收集上清液于一具刻度离心管中.
7.2固相萃取净化
将7.1中所得提取溶液转入经过预处理的MAX固相萃取柱中，以约1滴/秒流速使样品溶液全部通过固相萃取柱，弃去流出液.依次用5mL5%氨水溶液、5mL甲醇、5mL2%甲酸的甲醇-水溶液淋洗，淋洗液完全通过小柱后，弃去流出液，用真空泵抽干固相萃取柱5min以上.以4ml4%甲酸甲醇溶液洗 脱，洗脱液用干净的15mL具刻度试管收集，40C水浴下吹氮浓缩至1ml，用水定容至2ml，混匀.溶液以0.22um有机滤膜过滤，供测定.
7.3仪器参考条件
7.3.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：Z0RBAX Eclipse XDB-C18，1.8μm，50x2.1mm（i.d.），或相当者：b）流动相：甲醇5mmol/L乙酸铵溶液，梯度洗脱（梯度时间表见表1）： c）流速：250μL/min:d柱温：30C：e)进样量：30.
表1液相色谱的梯度洗脱条件
时间（min） 流速(μL/min) 5mmol/L乙酸铵溶液（%） 甲醇（%）0.00 250 60 401.00 250 0 1007.00 250 0 10012.00 7.50 250 250 60 60 40 40
7.3.2质谱参考条件
a) 质谱扫描方式：多反应监测（MRM）： 离子化模式：电喷雾电离负离子模式（ESI-）：b） c） 分辨率：单位分辨率：d其它参考质谱条件见附录A.
e)定量离子对：262.7>262.7，定性离子对：264.7>264.7、266.7>266.7、268.7>268.7.
7.4测定
7.4.1定性测定
的保留时间偏差在±2.5%之内：且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合标准工作溶 选择4对母离子进行MRM监控，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物.
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
相对高子丰度 >10%至 20%>50% >20%至50% ≤10%允许的最大偏差 ±20% ±25% ±30% ±50%
7.4.2定量测定
在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样，以峰面积为纵坐标，基质混合标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应 在仪器测定的线性范围内.五氯酚标准物质的多反应监测(MRM)色谱图参见附录B中的图B.1.
7.5空白实验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行.
8结果计算和表述
采用外标法定量，按式（1）计算五氯酚残留量.
式中：
x一试样中被测组分残留量，单位为微克每干克，μg/kg：c一从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每升，Hg/L：V样品溶液最终定容体积，单位为毫升，ml：
a一最终样品溶液所代表的试样质量，单位为克，g.
注：计算结果须扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字.
9精密度
9.1在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录D的要求.
附录E的要求.
