中华人民共和国国家标准
GB 5009.308-2025
食品安全国家标准
食品中抗坏血酸棕榈酸酯的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
食品安全国家标准
食品中抗坏血酸棕榈酸酯的测定
1范围
本标准规定了食品中抗坏血酸棕榈酸酯的液相色谱测定方法.本标准适用于食品中抗坏血酸棕榈酸酯的测定.
2原理
试样中的抗坏血酸棕榈酸酯用柠檬酸-异抗坏血酸甲醇溶液提取后，经反相液相色谱分离，二极管阵列检测器或紫外检测器检测，外标法定量.
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1甲醇（CHO）：色谱纯. 3.1.2乙晴（CHN）：色谱纯.3.1.3磷酸（HPO）.3.1.4柠檬酸（CHO ）.3.1.5异抗坏血酸（CHO）.
3.2试剂配制
3.2.1柠檬酸-异抗坏血酸甲醇溶液：称取1.0g柠檬酸和1.0g异抗坏血酸，用甲醇溶解并稀释至1 000 mL 3.2.2磷酸溶液（0.1%）：量取1.0mL磷酸，用水稀释至1000mL，混匀备用.3.2.3甲醇-乙晴溶液（5050）：将甲醇和乙晴按50：50的体积比混匀备用.
3.3标准品
3.3.1抗坏血酸棕榈酸酯标准品（CHO，CAS号：137-66-6）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.
3.4标准溶液配制
3.4.1抗坏血酸棕酸酯标准溶液（1.00mg/mL）：准确称取25mg（精确至0.1mg）标准品用柠檬酸异抗坏血酸甲醇溶液溶解并定容至25mL，混匀.临用现配.3.4.2抗坏血酸棕榈酸酯标准中间溶液（0.100mg/mL）：准确吸取1.00mg/mL标准溶液1.00mL 用柠檬酸-异抗坏血酸甲醇溶液稀释并定容至10mL，混匀.临用现配.
GB 5009.308-2025
5.0mL用柠檬酸-异抗坏血酸甲醇溶液稀释并定容至10mL，混匀，得到质量浓度分别为1.00μg/mL、 3.4.3抗坏血酸棕榈酸酯标准工作溶液：准确吸取标准中间溶液0.10mL、0.20mL0.50mL、1.0mL、
注：可在线性范国内适当调整标准工作溶液浓度点.
3.5材料
有机微孔滤膜：0.22μm.
4仪器和设备
4.1液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器.4.2电子天平：感量分别为0.01mg和0.1mg.4.3组织粉碎机.4.5离心机：转速不低于8000r/min. 4.4水平振荡器.
5分析步骤
5.1试样制备
液体样品如花生油、果蔬汁饮料等测定前摇匀；质地均匀的粉状、糊状样品如乳粉、果泥等测定前充粉碎），过筛，使其粒径小于2mm，混合均匀.样品置于避光密闭的容器内冷藏保存. 分混匀；其他固体、半固体样品如罐头、面包、燕麦片、糖果等粉碎（胶基糖果必要时可以采用剪碎或冷冻
5.2试样处理
5.2.1试样提取
称取试样5g（精确至0.001g）.置于50mL离心管中，加人30mL柠檬酸-异抗坏血酸甲醇溶液，盖紧管盖，置于水平振荡器上，以不低于250次/min振荡提取10min，将其全部转移至50mL容量瓶 中，用柠橡酸-异抗坏血酸甲醇溶液定容至刻度，混合均匀.
5.2.2净化
上述试样提取液用滤纸过滤（弃去初滤液）或8000r/min离心1min获取上清液后，经0.22μm有机微孔滤膜过滤至棕色样品瓶供高效液相色谱仪分析.
注：必要时试样溶液可用柠橡酸-异抗坏血酸甲醇溶液稀释使试样溶液中抗坏血酸棕榈酸酯的浓度在标准工作溶
液浓度范围内：试样溶液应于12b内上机测定.
5.3空白试验
除不加试样外，其他步骤均按5.2与试样同时处理.
5.4仪器参考条件
5.4.1色谱柱：C柱（4.6mm×150mm.5μm）或具有同等性能的色谱柱.5.4.2检测波长：245nm.5.4.3流动相：A为甲醇-乙晴溶液（5050），B为磷酸溶液（0.1%）. 2
5.4.4流速：1.0mL/min.5.4.5进样量：10zL.5.4.6柱湿：30℃5.4.7梯度洗脱程序见表1.
表1梯度洗脱程序
时间/min 流动相A/% 流动相B/%0 0 40 601.0 40 605 0 60 4012.0 95 519 0 95 520 0 40 6025 0 40 60
5.5标准曲线的制作
将标准系列工作溶液按照浓度由低到高的顺序注人高效液相色谱仪中，以抗坏血酸棕榈酸酯质量浓度为横坐标，以测得的峰面积为纵坐标，制作标准曲线.标准溶液的色谱图见附录A中图A.1.
5.6试样溶液的测定
将试样溶液注人高效液相色谱仪中，得到相应的峰面积，根据标准曲线得到试样溶液中抗坏血酸棕榈酸酯的质量浓度.
6分析结果的表述
试样中抗坏血酸棕榈酸酯的含量按式（1）计算：
式中：
X 试样中抗坏血酸棕榈酸酯的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）：p 由标准曲线得到的试样溶液中抗坏血酸棕榈酸酯的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）；p 由标准曲线得到的空白试验溶液中抗坏血酸棕榈酸酯的浓度，单位为微克每毫升（jpg/mL）；V 试样溶液定容的体积，单位为毫升（mL）；f 试样的质量，单位为克（g）： 试样溶液的稀释因子；1000--换算系数.计算结果保留3位有效数字.
注：当结果以抗坏血酸计时，试样中抗坏血酸棕树酸酶含量乘以换算系数0.425，即得抗坏血酸的含量；若结果需以油脂中抗坏血酸计，油脂含量依据GB5009 6测定.
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7精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.
8其他
当称样量为5g、定容体积为50mL时，本方法的检出限为5mg/kg，定量限为10mg/kg.
