GH
中华人民共和国供销合作行业标准
GH/T1106-2015
Determination of glycerol in honey-GC-MSmethod
中华全国供销合作总社 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草.本标准由全国蜂产品标准化工作组提出.本标准由中华全国供销合作总社归口.本标准主要起草人：柳菡、赵增运、陈雷、栾军、许蔚、沈崇钰、吴斌、张睿、陈磊、龚玉霞、余可. 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局.
蜂蜜中丙三醇含量的测定 气相色谱-质谱法
1范围
本标准规定了蜂蜜中丙三醇含量的气相色谱-质谱测定方法.本标准适用于蜂中丙三醇含量的测定，
本标准定量限为20.0mg/kg.
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件， 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样用N，N二甲基甲酰胺（DMF）溶解，与硅烷化试剂衍生化反应后，用正已烷萃取，用气相色谐-质谱法测定，内标法定量.
4试荆和材料
实验用水应符合GB/T6682中一级水的规定要求.
4.4正已烷：色谱纯，
4.5丙三醇标准物质，CAS：56-81-5，纯度≥98%.
4.6内标1，2，4-丁三醇标准物质，纯度≥98%，
4.7丙三醇标准储备溶液（10.0g/L）：准确称取250mg（精碘到1mg）的丙三醇标准品于25mL容量瓶中，用DMF（4.2）溶解并定容至刻度，存放于棕色标准储液瓶中，0C~4C保存，有效期1年，
4.8内标1，2，4-丁三醇储备溶液（10.0g/L）：准确称取250mg（精确到1mg）的1，2，4-丁三醇标准品于25mL容量瓶中，用DMF溶解并定容至刻度，存放于棕色标准储液瓶中，0C~4C保存，有效期1年，
4.9丙三醇标准中间溶液：准确移取标准储备液（4.7），用DMF将标准储备液（4.7）稀释成浓度为 100mg/L和10mg/L的标准中间溶液，存放于棕色标准储液瓶中.0C~4C保存，有效期6个月.
4.10内标1，2，4-丁三醇中间溶液：准确移取内标储备液（4.8），用DMF将内标储备液（4.8）稀释成浓度为1g/L的内标中间溶液，存放于棕色标准储液瓶中，0C~4C保存，有效期6个月.
4.11丙三醇和内标1，2，4-丁三醇混合标准工作溶液：准确移取适量的标准中间溶液（4.9）和内标中间
GH/T 1106-2015
3个月， 40.0mg/L，内标1，2，4-丁三醇浓度都为20.0mg/L的系列混合标准工作溶液，0C～4C保存，有效期
5仪器和设备
5.2分析天平：感量分别为0.1mg和0.01g. 5.1气相色谱-质谱仪：配电子轰击离子源（EI），5.3涡旋仪.5.4超声仪.5.5离心机：具备转速≥12000r/min的转子.5.6带蓝塑料离心管：50mL、1.5mL.
6样品的取样及预处理
60C的水浴中温热，待样品全部溶化后搅匀，迅速冷却至室温，在溶化时需注意防止水分挥发，制备好 取蜂蜜代表样品200g，未结品样品揽拌均匀，有结品析出的样品可将样品瓶盖好后，置于不超过的试样装人洁净容器内，密封，标明标记，在制样过程中，应防止样品污染或发生残留含量变化，于0℃～4℃保存.
7试验方法
7.1供试样品溶液的制备
7.1.1提取
匀，加人25mL的DMF（4.2），加盖涡旋混匀（如有必要，需强力振摇使之溶解）.超声15min，待衍生，
7.1.2衍生
50pL，加盖涡旋反应1 min，静置5min，再加人正已烷（4.4)0.9 mL 加盖涡策30 s，以12000r/min离心 准确移取7.1.1中的待衍生样品溶液50L于1.5mL的塑料离心管中，加人衍生化试剂BSTFA（4.3）3min，塑料滴管移取上层正已烷层至进样瓶，GC-MS分析.
7.2标准溶液衍生
准确移取系列混合标准工作溶液（4.11)50L于1.5mL的塑料离心管中，加人衍生化试剂BSTFA（4.3）50μL，加盖涡旋反应1min，静置5min.再加人正已烷（4.4)0.9mL，加盖涡旋30s，以12000r/min离心3min，塑料滴管移取上层正已烷层至进样瓶，GC-MS分析.
7.3色谐条件
a）色谱柱：DM-5MS，30mX0.25mmX0.25gm，或相当者：b）载气：高纯氮气（≥99.999%），流速：1.0mL/min；e）升温程序：60C保持1min，以30C/min升至240C保持2min，再以50C/min升至280℃；e）进样量：1L; d）进样口温度：250C；
g）接口温度：280℃. f）进样方式：脉冲不分施进样；
7.4质谱参考条件
a）离子源温度：230C；b）四极杆温度：150C； c）电离模式：EI；d）溶剂延迟时间：4.5min；e）数据采集模式：选择离子监测方式（SIM），监测离子见表1.
表1选择离子表
待测物 保留时间 min 定性离子 m/z 定量离子 m/z丙三醇 4.8 117 205 147内标1.2.4-丁三醇 5.2 219.1 103.1
7.5气相色谱-质谱测定及确证
7.5.1定性测定
进行样品测定时，如果检出的质量色谱峰保留时间与标准品一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图对比，最大允许相对偏差不超过表2中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物.
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子率度/% >50 >20~50 >10~20 10允许的相对偏差/% ±10 ±15 ±20 ±50
7.5.2定量测定
物的特征离子的色谱峰面积与内标衍生产物的特征离子的色谱峰面积比值为纵坐标、工作溶液浓度 丙三醇标准工作溶液（4.11）的衍生后溶液在气相色谱-质谱设定条件下分别进样，以丙三醇衍生产（mg/L）为横坐标，绘制6点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中丙三醇衍生产物的响应值均在仪器测定的线性范围内.在上述色谱条件下，丙三醇衍生产物的参考保留时间为4.8min，内标衍生产物的参考保留时间为5.2min，标准溶液衍生后的总离子流色谱图（10.0mg/L）见附录A中的图A.1，丙三醇和内标物的衍生产物的质谱图见附录B中的图B.1和图B.2.
7.6平行试验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定.
7.7空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行，
