NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 2058-2014代替NY/T 2058-2011
水稻二化抗药性监测技术规程
Guideline for insecticide resistance monitoring of the striped stem borer
中华人民共和国农业部发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准代替NY/T2058-2011《水稻二化.抗药性监测技术规程毛细管点滴法》，与NY/T2058-2011相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：
修改了标准名称，改为《水稻二化抗药性监测技术规程》； 修改了范围，增加了稻苗浸渍法对水稻二化抗药性监测方法：修改了二化螺抗药性水平的分级标准；一修改了附录A水稻二化人工饲料配方和制备，增加了人工饲料配方Ⅱ.
本标准由农业部种植业管理司提出并归口，本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、南京农业大学、江苏省植物保护站. 本标准主要起草人：邵振润、高聪芬、张帅、沈晋良、李永平、吴敏、姚蓉、张绍明.本标准的历次版本发布情况为：
NY/T .
水稻二化螺抗药性监测技术规程
1范围
本标准规定了毛细管点滴法和稻苗浸溃法监测水稻二化[Chilo suppressalis（Walker）]抗药性的方法.本标准适用于水稻二化对杀虫剂的抗药性监测.
2试剂与材料
2.1生物试材试虫：水稻二化[Chilo suppresalis（Walker）]. 供试植物：采用感虫品种，如TN1或油优系列等.2.2试验药剂原药或母药.2.3试验试剂
TritonX-100；丙酮（或二甲基甲酰胺）；所用试剂一般为分析纯.
3仪器设备
3.1电子天平（感量0.1mg）.3.2天平（感量1g）.3.3容量瓶（10mL、25mL）. 3.4青霉索瓶（容量为5mL）.3.5移液管（1mL、2mL、5mL).3.6量筒（100mL）.3.7玻璃烧杯（1000mL).3.8塑料小杯（直径5cm.高4.5cm）.3.9培养m（小号培养Ⅲ：直径5cm：中号培养Ⅲ：直径6.5cm）. 3.10滤纸片（直径6.5cm）.3.11养虫笼（长23cm×宽23cm×高32cm）.3.12养虫缸（直径15cm.高10cm）或玻璃广口瓶（瓶底直径8cm.高10cm）.3.13毛细管点滴器：容积通常为0.04gL~0.06μL（精确度为0.01gL）.3.14钢精钢（中号：直径24cm.高13cm；大号：直径33cm.高18cm）， 3.15白色瓷盘（长30cm、宽20cm、高4.5cm），3.16高压灭菌锅（最大安全压力：102kPa；最高温度：121°℃）.3.17恒温培养箱（容量320L.温度范围0C~50°C，光照度120001x）、恒温养虫室或人工气候箱.3.18电磁炉.3.19镊子、剪刀、小号毛笔、
4试验步骤
4.1试材准备
4.1.1试虫采集
选当地具有代表性的稻田3块~5块，每块田随机5点采集，每地采集二化娱卵块200块以上，或采集幼虫、500头以上，成虫200头以上（成虫的采集可在白天使用捕虫网、养虫笼等工具捕提或夜晚灯光诱集），供室内饲养.
4.1.2试虫饲养
4.1.2.1成虫产卵
采集的成虫放人恒温培养箱中[温度（26土1）℃、光周期16h8h（L：D）]的养虫笼中，相对湿度为85%~90%，在未用药处理的感虫、生长嫩绿的秧苗上分批产卯（2d~3d一批）.所产卵块分批在恒温培养箱[温度（28士1）C、光周期16h：8h（L：D）]中培育至黑头，
4.1.2.2幼虫饲养
将大田采集或室内饲养已黑头的卵块接人盛有人工饲料或栽有5cm~6cm高稻苗的养虫缸或玻璃广口瓶中（每缸/瓶幼虫密度控制在约100头），置于温度为（28士1)C、光周期为16h：8h（L：D）的恒温培养箱、恒温养虫室或人工气候箱中，设弱下光照，以免幼虫逃逸，饲养至生理状态一致、体重范围mg的4龄中期幼虫为标准试虫，供毛细管点滴法试验. 在每头0.45mg~0.65mg的2龄中期幼虫为标准试虫，供稻苗浸渍法试验；体重范围在每头6mg~9
4.1.3供试水稻
供取食水稻：取一定量水稻种子，于70℃C温水中表面消毒10min，在适宜温度下（一般28℃C）浸种2d.催芽至露白后播人玻璃广口瓶或养虫缸中，瓶/缸口封上一层保鲜膜并扎少量透气孔，置于适宜温度下培养.待醋苗长至5cm~6cm时供初孵幼虫取食.
供稻苗浸渍法试验水稻：同上述方法催芽后，在温室内用直径5cm，高4.5cm的塑料小杯播种水稻，每杯25株~35株稻苗，选择生长3周（约25cm高）的稻苗供试.
4.1.4试验人工饲料
按附录A配制人工饲料，现配现用，或于4C冰箱中保存，不超过7d，试验前从冰箱中取出，待回温至室温，即可用于饲养幼虫或点滴试验（每小号培养皿内加长约2cm、厚约0.5cm的条状饲料）.
4.2药剂配制
4.2.1毛细管点滴法
在电子天平上用容量瓶称取一定量的原药，用丙酮等有机溶剂溶解（杀虫单、杀螺丹等用体积为1：1的丙酮：水混合液）.配制成一定浓度的母液.用移液管吸取一定量的母液至青霉索瓶，用上述溶剂配制成一定质量浓度的药液供预备试验，根据预备试验结果，再按照等比法用青霉素瓶配制5个~6 个系列质量浓度，每个浓度的药液量不少于2mL.
4.2.2稻苗浸渍法
在电子天平上用容量瓶称取一定量的原药/制剂，根据溶解度的大小选择合适的溶剂将药剂溶解，配制成一定浓度的母液（双酰胺类原药用二甲基甲酰胺溶解，B等制剂用蒸馏水溶解），原药配制的母个系列质量浓度.每个浓度的药液量不少于400ml. 液需加人终浓度0.1%TritonX-100，再用蒸馏水稀释，根据预备试验结果，按照等比法设置5个~6
4.3处理方法
4.3.1毛细管点滴法
挑取每头体重为6mg~9mg4龄中期幼虫置于盛有人工何料的小号培养皿中.每Ⅲ5头，每浓度重复6次.共30头.供试药液浓度按从低到高的顺序处理，用容积为0.04gL~0.06L的毛细管点滴 器将药液逐头点滴于幼虫胸部背面，以点滴丙酮（或丙酮：水=1：1）为空白对照.处理后将培养Ⅲ转移至温度为（28±1）℃，光周期为16h：8h（L：D）的条件下饲养和观察.
4.3.2稻苗浸渍法
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在栽有高约25cm稻苗的塑料小杯土表倒上约2mL1.5%琼脂水溶液至杯口平齐，静置20min待凝固.将稻苗倒置浸入配制好的药液中，浸渍到稻苗基部10s，取出干至无明水，将稻茎齐根剪下，去除上部叶片，留下5.5cm~6.0cm的茎秆：放人事先准备好的中号培养Ⅲ（每Ⅲ底部垫入四层滤纸.加人3mL无菌水保湿）中，每Ⅲ15根蒸秆；按试验设计剂量从低到高的顺序重复上述操作，每浓度4个重复，以含有与最高浓度药液等剂量的有机溶剂的蒸馏水溶液作空白对照，
用毛笔将试虫接人培养Ⅲ中，每显10头，用两层黑棉布覆盖后再盖上培养显盖，处理后的二化螺幼虫放置于温度为（28±1）℃，光周期为16h：8h（L：D）条件下饲养和观察.
4.4结果检查
4.4.1毛细管点滴法
长调节剂类杀虫剂）检查试虫死亡情况，记录总虫数和死虫数. 分别于处理后2d（有机磷类杀虫剂）、3d（大环内酯类杀虫剂）、4d（沙蚕毒素类杀虫剂）、5d（昆虫生
4.4.2稻苗浸渍法
处理6d后检查试虫死亡情况，记录总虫数和死虫数.
4.4.3死亡判断标准
用毛笔轻触虫体，虫体不能协调运动即判断为死亡.
5数据统计与分析
5.1计算方法
根据调查数据，计算各处理的校正死亡率，按式（1）和式（2）计算，计算结果均保留到小数点后两位.
式中：
P一死亡率，单位为百分率（%）；K一表示死亡虫数，单位为头；
N--表示处理总虫数，单位为头.
（2)
式中：
P-校正死亡率，单位为百分率（%）；
P一处理死亡率，单位为百分率（%）；
P.一空白对照死亡率，单位为百分率（%）.
若对照死亡率20%，试验需重做.
5.2统计分析
95%置信限、b值及其标准误. 采用SAS、POLO、PROBIT、DPS.SPSS等软件进行统计分析，求出每个药剂的LD（LC）值及其
6抗药性水平的计算与评估
6.1敏感毒力基线
水稻二化对部分杀虫剂的敏感毒力基线（参见附录B）.
6.2抗药性水平的分级标准
抗药性水平的分级标准见表1.
