附件2
食品中呕吐毒素的快速检测 胶体金免疫层析法（KJ201702）
1范围
本方法规定了食品中呕吐毒素的胶体金免疫层析快速检测方法.本方法适用于谷物加工品及谷物碾磨加工品中呕吐毒素的快速测定.
2原理
样品中呕吐毒素与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和与检测卡中检测线（T线）上呕吐毒素-BSA偶联物的免疫反应，从而导致检测线颜色深浅的变化.通过检测线与控制线（C 线）颜色深浅比较，对样品中呕吐毒素进行定性判定.
3试剂和材料
除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水.
3.1试剂
3.1.2甲醇. 3.1.1提取液：水或胶体金免疫层析检测卡专用提取液.
3.2参考物质
呕吐毒素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥99%.
表1呕吐毒素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量
中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子量脱氧雪腐镰刀菌烯醇 Deoxynivalenol 51481-10-8 CHO 296.32
注：或等同可溯源物质.
3.3标准溶液配制
准确称取适量呕吐毒素参考物质（精确至0.0001g），用甲醇溶解，配成0.10mg/mL的标准储备液，-20C保存，有效期3个月.
3.4材料
3.4.1呕吐毒素胶体金免疫层析检测卡.3.4.2中速定性滤纸. 3.4.3滤膜：0.45um水相滤膜.
4仪器及设备
4.1天平：感量分别为0.01g和0.0001g.
4.2粉碎机.
4.3样品筛：0.9mm
4.4漩涡混合器：1500rpm/min.
4.5移液器：100μL，200uL，1.0mL.
4.6恒温装置：37.0C±2.0°℃.
4.7环境条件：温度15-30℃，湿度≤80%.
5分析步骤
5.1试样制备
样品粉碎：将待测样品粉碎，过0.9mm样品筛，充分混合均匀，备用.
5.2试样提取
准确称取粉碎混匀样品5.0g于离心管中，加入25.0mL水或专用提取液（3.1.1），漩涡混合器（4.4）提取5min，静置1min，中速定性滤纸（3.4.2）过滤，滤液用0.45um水相滤膜（3.4.3） 过滤，将滤液稀释至检测卡（3.4.1）检测范围内，混匀，即得待测液.
5.3测定步骤
吸取150uL上述待测液加入到检测卡中，恒温装置内反应6min后进行结果判定.
5.4质控实验
每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验.
5.4.1空白试验
称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作.
5.4.2加标质控试验
准确称取空白试样5.0g或适量（精确至0.01g）置于离心管中，加入适量呕吐毒素标准溶液，使呕吐毒素浓度为1.0mg/kg，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作.
6结果判定要求
根据控制线（C线）和检测线（T线）颜色变化进行结果判定，采用目测法对结果进行判定，比色法和消线法判定原则如下：
6.1比色法
6.1.1无效
6.1.2阳性结果 控制线（C线）不显色，无论检测卡（T线）是否显色，表示操作不正确或检测卡已失效.控制线（C线）显色，检测线（T线）显色明显浅于控制线（C线），判为阳性.6.1.3阴性结果 控制线（C线）显色，检测线（T线）比控制线（C线）显色深或检测线（T线）与控制线（C线）显色基本一致，判为阴性.
图1比色法结果判定示意图
6.2消线法
6.2.1无效
控制线（C线）不显色，无论检测卡（T线）是否显色，表示操作不正确或检测卡已失效.
6.2.2阳性结果
控制线（C线）显色，检测线（T线）不显色，判为阳性.
6.2.3 阴性结果
控制线（C线）显色，检测线（T线）显色，判为阴性.
图2消线法结果判定示意图
6.3质控样品要求
空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性.
7结论
当检测结果为阳性时，应对结果进行确证.
8性能指标
8.1检测限：呕吐毒素为1.0mg/kg.
8.2判定限：呕吐毒素为0.9mg/kg.
8.3假阴性率：≤5%.
8.4假阳性率：≤10%.
注：假阳性率和假阴性率计算方法参照《食品快速检测方法评价技术规范》（食药监办科（2017）43号）执行.
9其他
本方法测定步骤和结果判读也可以根据厂家检测卡的说明书进行，但应符合或优于本方法规定的性能指标.
酰化衍生物的测定》. 本方法参比方法为GB5009.111-2016《食品安全国家标准食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙
本方法负责起草单位：中国农业科学院油料作物研究所.
湖北省食品药品监督检验研究院. 验证单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，南京工业大学食品与轻工学院，
主要起草人：李培武、王督、陈爱亮、施祖灏、范志勇.
