辣椒制品中苏丹红I的快速检测 胶体金免疫层析法（KJ201801）
1范围
本方法规定了辣椒制品中苏丹红I的胶体金免疫层析快速检测方法.本方法适用于辣椒酱、辣椒油、辣椒粉等辣椒制品中苏丹红I的快速测定.
2原理
本方法采用竞争抑制免疫层析原理.样品中的苏丹红1与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化.通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中苏丹红I进行定性判定.
3试剂和材料
除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水.
3.1试剂
3.1.2无水硫酸镁. 3.1.1乙.3.1.3 正已烷.3.1.4二氯甲烷.3.1.6氢氧化钠溶液（2mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.5）8g，用水溶解并稀释至100mL. 3.1.5氢氧化钠.3.1.7无水乙醇.3.1.8复溶液：将无水乙醇（3.1.7）与水按照体积比25:75混匀.
3.2参考物质
3.2.1苏丹红I参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥95%.
表1苏丹红I参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量
中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子量苏丹红I Sudan I 842-07-9 CHNO 248.28
注：或等同可溯源物质.
3.3.1苏丹红I标准储备液（1mg/mL）：精密称取苏丹红I标准品（3.2.1）适量，置于10mL容量瓶中，加入适量乙（3.1.1）超声溶解后，用乙晴稀释至刻度，据匀，制成浓度为1mg/mL的苏丹红I标准储备液.-20C避光保存，有效期6个月.
3.3.2苏丹红I标准中间液（1μg/mL）：精密量取苏丹红I标准储备液（1mg/mL）（3.3.1）100uL，置于100mL容量瓶中，用乙腊（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的苏丹红I标准 中间液.
3.4材料
3.4.1固相萃取柱：CNW Poly-sery MIP-SDR固相萃取柱（200mg/3mL），或相当者. 3.4.2苏丹红1胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为辣椒酱、辣椒油、辣椒粉.3.4.2.1金标微孔.3.4.2.2试纸条或检测卡.
4仪器和设备
4.1移液器：200uL、1mL和5mL.4.2涡旋混合器.4.3离心机：转速≥4000r/min.4.5氮吹仪.4.6水浴锅.4.7环境条件：温度15℃～35℃，湿度≤80%.
4.4电子天平：感量为0.01g.
5分析步骤
5.1试样制备
取适量样品，液体样品或半固体样品充分混匀，固体样品充分粉碎混匀.
5.2试样的提取
5.2.1辣椒酱
称取辣椒酱2g（精确至0.0lg）于15mL离心管中，加入0.5g无水硫酸镁（3.1.2）和5mL正已烷（3.1.3）提取液，涡旋振荡1min后，4000r/min离心5min.将上清液全部加入到固相萃取柱（3.4.1）中，流出液弃去.再加入6mL正已烷淋洗固相萃取柱，流出液弃去.用2mL二氯甲烷（3.1.4）洗 脱固相萃取柱，收集洗脱液吹干.精密加入400uL复溶液（3.1.8），涡旋混合lmin，作为待测液，立即测定.
5.2.2 辣椒油
称取辣椒油5g（精确至0.0lg）于15mL离心管中，加入8mL正已烷（3.1.3）进行提取，涡旋柱，流出液弃去.用2mL二氯甲烷（3.1.4）洗脱固相萃取柱，收集洗脱液吹干.精密加入400uL 振荡1min后，将上清液全部加入到固相萃取柱中，流出液弃去.再加入6mL正已烷淋洗固相萃取复溶液（3.1.8），涡旋混合1min，作为待测液，立即测定.
5.2.3辣椒粉
称取辣椒粉3g（精确至0.0lg）于50mL离心管中，加入8mL乙晴（3.1.1）提取，涡旋振荡1min后，6000r/min离心5min.转移上清液于10mL离心管中，吹干后加入2mL氢氧化钠溶液（3.1.6），涡旋混匀30s后置于80℃水溶皂化5min.再加入2mL正已烷（3.1.3），涡旋萃取30s后，6000r/min离心5min，转移上清液于新的10mL离心管中，加入无水硫酸镁（3.1.2）0.5g，涡旋振荡30s后， 4000r/min离心5min，转移上清液于10mL离心管中吹干.精密加入400uL复溶液（3.1.8），涡旋混合lmin，作为待测液，立即测定.
5.3测定步骤
5.3.1试纸条与金标微孔测定步骤
吸取200uL待测液于金标微孔（3.4.2.1）中，抽吸5~10次使混合均匀，室温温育3~5min，将试纸条（3.4.2.2）吸水海绵端垂直向下插入金标微孔中，温育5-8min，从微孔中取出试纸条，进行结果判定.
5.3.2检测卡与金标微孔测定步骤
金标微孔中全部溶液滴加到检测卡（3.4.2.2）上的加样孔中，温有5~8min，进行结果判定.
吸取200uL待测液于金标微孔（3.4.2.1）中，抽吸5~10次使混合均匀，室温温育3~5min，将
5.4质控试验
每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验.
5.4.1空白试验
称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作.
5.4.2加标质控试验
（3.3.2），使苏丹红I添加浓度为10μg/kg，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作. 准确称取空白试样（精确至0.0lg）置于具塞离心管中，加入一定体积的苏丹红I标准中间液
6结果判定
通过对比控制线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定.目视判定示意图见图1.
6.1无效
控制线（C线）不显色，表明不正确操作或试纸条/检测卡无效.
6.2阴性结果
检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色深或者检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色相当，表明样品中苏丹红I低于方法检测限，判定为阴性.
6.3阳性结果
的含量高于方法检测限，判定为阳性. 检测线（T线）不显色或检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色浅，表明样品中苏丹红I
6.4质控试验要求
空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性.
b） 检测卡图1目视判定示意图
7结论
当检测结果为阳性时，应对结果进行确证.
8性能指标
8.2灵敏度：灵敏度应≥99%8.3特异性：特异性应≥85%.8.4假阴性率：假阴性率应≤1%.8.5假阳性率：假阳性率应≤15%.4
8.1检测限：10μg/kg.
注：性能指标计算方法见附录A
9其他
本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定.方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定 的各项性能指标.
本方法参比标准为GB/T19681-2005《食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法》.
