中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T4817-2017
进出口食用动物中克伦特罗、 莱克多巴胺、沙丁胺醇残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法
Determination of clenbuterol.ractopaminesalbutamol residues in edibleanimalforimportandexport-HPLC-MS/MSmethod
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口.本标准主要起草人：张金玲、王凤美、梁广辉、郭礼强、孙军、颜显辉、张艺兵、赵丽青. 本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局.
进出口食用动物中克伦特罗、 莱克多巴胺、沙丁胺醇残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法
1范围
本标准规定了进出口食用动物中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法.
测定. 本标准适用于进出口猪、羊、牛等动物毛发和血浆中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇残留量的
2规范性引用文件
件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法原理
毛发样品经碱水解，有机溶剂提取浓缩，血浆样品用酶提取，经温合型阳离子交换固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱法测定，内标法定量.
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1乙醇.
4.2氢氧化钠.
4.3乙酸铵.
4.4氯化钠.
4.5叔丁醇.
4.6冰乙酸.
4.7甲醇：色谱纯.
4.8正已烷：色谱纯.
4.9乙酸乙酯：色谱纯.
4.10甲酸：色谐纯.
4.11氨水：25%~28%
4.12浓盐酸：36%~38%.
SN/T 4817-2017
1 079 units/ml. 4.15乙酸铵缓冲溶液（2mol/L）：称取乙酸铵（4.3）77.0g，用水稀释并定容至500ml，混匀，加冰乙酸（4.6）调pH为5.2.4.16固相萃取（SPE）柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚 物，60mg，3ml.或性能相当者.使用前依次用5ml.甲醇（4.7）、5ml.水对柱子进行活化.4.17洗脱溶液：50mL乙酸乙酯（4.9）、45mL甲醇（4.7）与5mL氨水（4.11）混匀.4.18定容液：移取1mL甲酸（4.10），用水稀释并定容至1000mL，混匀.4.19氮气：纯度≥99.99%4.20标准品：盐酸克伦特罗（Clenbuterolhydrochloride），CAS编号：21898-19-1，纯度≥98.5%；盐酸 莱克多巴胺（Ractopaminehydrochloride）CAS编号，90274-24-1.纯度>98.0%；硫酸沙丁胺醇（Salbu-tamol sulfate).CAS编号：51022-70-9，纯度≥99.0%.4.21标准储备溶液（1000mg/L)：分别准确称取盐酸克伦特罗，盐酸菜克多巴胺、硫酸沙丁胺醇标准品（折合成目标化合物10.0mg）（4.20），分别用适量甲醇溶解，并用甲醇定容至10mL，保存于-18℃4.22标准中间液（1000μg/L）：用甲醇分别稀释盐酸克伦特罗、盐酸莱克多巴胺、硫酸沙丁胺醇标准 冰箱，有效期12个月.储备溶液（4.21）至1000pg/L，4C以下避光保存，有效期为6个月.4.23同位索内标物（100mg/L）：克伦特罗内标溶液（Clenbuterol-D9），浓度为100mg/L，溶剂为丙酮：盐酸菜克多巴胺内标物（Ractopaine-D3-HCl）.统度≥98.0%，准确称取盐酸莱克多巴胺内标物（折 合成目标化合物10.0mg），用适量甲醇溶解.并用甲醇定容至100ml：沙丁胺醇内标溶液（Salbutamol-D3），浓度为100mg/L，溶剂为丙酮.4.24同位素内标中间溶液（1.0mg/L）：用甲醇分别稀释克伦特罗D9、莱克多巴胺-D3、沙丁胺醇-D3（4.23）至1.0mg/L.4℃以下避光保存，有效期为6个月4.25标准工作液（10μg/L）：根据需要移取适量标准中间液、同位素内标中润液，用甲醇稀释，配制浓
度均为10μg/L的标准及其同位素内标工作液，该溶液临用前配制.
5仪器
5.4冷冻离心机：最高转速大于或等于12000r/min5.8pH计.5.9电热干燥器.5.10 水浴锅.
5.1液相色诺-质谱/质谱联用仪：配电喷雾离子源（ESI）.
5.2分析天平：感量为0.01g和0.1mg
5.3旋涡混合器.
5.5氮气浓缩仪.
5.6水浴振荡器.
5.7周相萃取装置.
6样品制备
6.1毛发
将样品依次用热水、乙醇清洗，重复清洗三次后，用滤纸吸干.50C电热干燥2h，将毛发剪碎至约2mm，充分混匀，置于密封干燥处待测
6.2血浆
取静脉血10mL，置人抗凝血试管中混匀，离心取上清于-18℃以下冷冻保存.
7测定步骤
7.1提取
7.1.1毛发
称取1g（准确至0.01g）样品至100mL-带螺盖聚丙烯离心 添加100pL同位素内标（4.25）工作液，加人1mol/L氢氧化钠溶液20ml.旋紧螺旋盖，充分振荡混匀，80C水浴2h，取出冷至室温， 管中用2mol/L盐酸调节pH至9.5~10，加氯化钠至饱和.然后加人15ml.萃取溶液（4.13）振荡混匀，4℃条件下10000r/min离心10min，萃取两次，合并上层举取液，30C水浴条件下氮气吹干.加人10mL乙酸铵缓冲溶液（4.15）溶解残渣，振荡混匀，待净化
7.1.2血浆
准确移取1mL试样，置于50mL螺旋益聚丙烯离心管中，添加100pL同位索内标（4.25）工作液，加人15mL乙酸缓冲溶液（4.15），然后加人20μL.β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶（4.14），充分振荡经滤纸过滤，并用2mL乙酸铵缓冲溶液（4.15）洗涤滤纸，收集全部滤液，待净化 混匀，37C温育过夜.4℃条件下10000r/min离心5min.收集上清液于螺旋盖聚丙烯离心管中，样液
7.2净化
将7.1待净化溶液以低于1mL/min的流速过SPE 小柱（4.16），再依次用5mL水，5mL甲醇，5mL正已烷淋洗，真空抽干，最后用5ml洗脱溶液（4.17）洗脱，收集选脱液，在30C水浴条件下氮气 吹干.用0.5mL定容液（4.18）溶解，涡混均匀.样液过0.22um滤膜，供液相色诺-质谱/质谱仪测定.
7.3测定
7.3.1液相色谱条件
液相色谱条件如下：
a）色谱柱：Ca柱，100mm×3.0mm（内径）粒度1.8μm或性 能相当者：b）进样量：10μL;c）流速：0.35mL/min; d）柱温：40℃e）流动相：A：甲醇，B：0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱条件见表1.
表1梯度洗脱程序表
时间/min 施动相A/% 15 流动相B/% 850 3 60 405 60 405.1 15 858 5 15 85
