T/CNHAW 中国民族卫生协会团体标准
T/CNHAW0021-2025
人体尿液中16种抗生素的测定 液相色谱一串联质谱法
Determination of sixteen antibiotics in human urineLiquid chromatography tandem mass spectrometry
（报批稿）
中国民族卫生协会 发布
目次
前言1范围.2规范性引用文件3原理.4试剂和材料5仪器设备，6样品采集、运输和保存，7分析步骤，8方法特性9质量保证与质量控制10注意事项附录A（资料性） 16种抗生素的基本信息附录B（资料性） 16种抗生素及内标的参考质谱参数和保留时间附录C（资料性） 16种抗生素的提取离子流图 10
前言
起草. 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定
本文件的附录A、附录B、附录C为资料性附录.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由中国民族卫生协会提出并归口.
本文件起草单位：中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、山东省公共卫生临床中心、山东省疾病预防控制中心、无锡市疾病预防控制中心、深圳市罗湖区疾病预防控制中心、茂名市中医院.
本文件主要起草人：胡小键、张续、朱英、李振环、倪一平、付慧、王晓琳、吴林林、郑风家、吴宇伉、朱波、纪翔、徐建华.
本文件为首次发布.
人体尿液中16种抗生素的测定 液相色谱一串联质谱法
1范围
本文件规定了人体尿液中16种抗生素的液相色谱一串联质谱测定方法.
本文件适用于尿液样品中16种抗生素（阿奇霉素、克拉霉素、罗红霉素、四环素、强力霉素、土霉素、恩诺沙星、培氯沙星、洛美沙星、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲聪唑、磺胺嘧啶、甲氧苄啶、磺胺喹聪啉、磺胺氯哒嗪、林可霉素）的测定.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T38735人类尿液样本采集与处理
3原理
净化，液相色谱一串联质谱正离子多反应监测模式测定，以目标物的保留时间和离子丰度比定性，同位素内标法定量.
4试剂和材料
4.1除非有特殊说明，试剂均为色谱纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.6甲醇（CHOH）.
4.7β-葡萄糖醛酸酶：来源于罗曼蜗牛（Helixpomaria)，活性≥85000U/mL.
4.8乙酸铵缓冲溶液（c=1.0mol/L，pH=5.5）：称取乙酸铵19.3g于500mL烧杯中，加入约200mL水，混匀，加入乙酸，调节pH至5.5，倒入250mL容量瓶，用水定容.
4.9标准物质：恩诺沙星、培氯沙星、洛美沙星、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲嗯唑、磺胺嘧啶、甲氧苄啶、磺胺氯哒嗪、阿奇毒素、克拉毒素、罗红毒素、四环素、磺胺喹聪啉和林可毒素纯度为96%以上，强力毒素纯度为92%以上，土毒素纯度为93%以上：标准物质的基本信息见附录A.
4.10同位素内标：D-阿奇霉素、C-D-克拉霉素、D-罗红霉素、D-强力霉素、D-恩诺沙星、D-培氟沙星、D-洛美沙星、D-磺胺二甲嘧啶、"C-磺胺甲聪唑、D-磺胺喀啶、C-甲氧苄啶、D-磺胺喹聪啉、D-磺胺氯哒嗪、D-林可霉素纯度为95%以上，D-四环素纯度为80%以上.
4.11标准储备溶液：分别准确称取标准物质和内标10mg（精确至0.1mg）于10mL容量瓶，用甲醇溶解并定容，配成1.00g/L的单标标准储备溶液，-20C以下保存6个月：也可直接使用符合要求的有证标准溶液.
4.12混合标准中间溶液：分别准确移取各目标物标准储备溶液适量，用甲醇配制成10.0mg/L的混合 标准中间溶液，-20℃以下可保存3个月.
4.13混合标准使用溶液：取混合标准中间溶液0.100mL置于10mL容量瓶中，用20%（V/V）甲醇水溶液定容，配成100ug/L的混合标准使用溶液，现用现配.的混合内标中间溶液，置于冰箱-20℃以下保存3个月.4.15同位素混合内标使用溶液：取同位素混合内标中间溶液1.00mL置于10mL容量瓶中，用20%4.1696孔固相萃取板（或萃取柱）：采用聚苯乙烯二乙烯基苯哦略烷酮亲水亲酯平衡填料（30mg， （V/V）甲醇水溶液配制成400ug/L的同位素混合内标使用溶液，现用现配.2mL）或性能相当者.
5仪器设备
5.2电子天平：感量为0.1mg和0.01g- 5.1液相色谱-三重四极杆质谱仪：配电喷雾离子源.5.3恒温水浴锅：可控制37℃土2C.5.4离心机：最大转速4500rmin. 5.596孔固相萃取板装置或固相萃取装置.5.6涡旋混匀器.5.7氮吹仪.
6样品采集、运输和保存
6.1样品采集
按GB/T38735中规定的方法采集.样品最少采集2.5mL.采集的样品应装在硼硅酸盐玻璃或聚丙烯材质的采样管中，使用聚丙烯或聚四氟乙烯材质的盖子，不得使用橡胶塞.
实际样品相同的采样管，在采样现场进行同步操作.. 样品采集过程中增加现场空白样品的采集.现场空白样品需采用不含有待测目标物的纯水，使用与
6.2样品运输和保存
现场采集时，如无冷冻保存条件，可先将尿液样品在放置有冰袋或冰盒的保温箱中暂存，并在12h内-20C冷链运输至实验室，避光保存.空白样品随同尿液样品保存和运输.尿液样品在-80℃下可至少保存2周.
7分析步骤
7.1样品前处理
7.1.1样品准备
将冻存的尿液样品取出，在4C下解冻并自然放置至室温.
7.1.2样品制备
用涡旋混匀器混匀尿液样品，准确移取1.00mL于96孔收集板中（或5mL塑料离心管中），依次加入400μg/L的混合内标（4.15）10μL、B-葡萄糖醛酸酶（4.7）20gL、乙酸铵缓冲溶液（4.8）200uL，在涡旋混匀器上充分振荡，置于37C水浴酶解16h，取出冷却至室温.离心10min（4500r/min）， 取上清液进行固相萃取.
7.1.3固相萃取
依次用1mL甲醇和1mL水活化96孔固相萃取板（或萃取柱）.将7.1.2的上清液转移至96孔固相萃取板（或萃取柱）.在不加压力的条件下依靠自然重力过板（或柱）.样品过板（或柱）后，用1mL纯水快速淋洗，负压抽干5min，后用1mL甲醇缓慢洗脱固相萃取板（或萃取柱），重复一次，收集洗
