CCS X 69 ICS 67. 180. 20
QB 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T8140-2025
发酵液中麦角硫因的测定高效液相色谱法 Determination of ergothione in fermentation broth-High performance liquid chromatographymethod
2025-04-10发布2025-11-01实施
中华人民共和国工业和信息化部发布
QB/T8140-2025
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。
本文件由中国轻工业联合会提出。
本文件由全国食品工业标准化技术委员会（SCA/TC64）归口。
本文件起草单位：国珍健康科技（北京）有限公司、安徽旭辰生物科技有限公司、浙江华睿生物技 术有限公司、华熙生物科技股份有限公司、江南大学、中国生物发酵产业协会、天津科技大学、福建师 范大学、中轻食品工业管理中心。
本文件主要起草人：关丹、张丽梅、束震、化春光、陆震、惠人杰、谢希贤、柯崇榕、杨晓明、 侯思远、邢岩、李颖、王玥、任月辉。
本文件为首次发布。
QB/T 8140-2025
发酵液中麦角硫因的测定高效液相色谱法
1范围 本文件描述了麦角硫因发酵液中麦角硫因含量测定的高效液相色谱法。
本文件适用于麦角硫因发酵液中麦角硫因含量的测定。
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用 于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3. 1 发酵液fermentationbroth 将微生物菌种接入液体培养基中，在适当条件下，经过一段时间的培养，微生物菌种利用培养基中 的营养成分进行代谢活动，最终形成的包含菌体、代谢产物以及未被利用的培养基成分的液体。
3. 2 发酵清液fermented clearliquid 发酵液（3.1）通过离心或过滤等分离手段去除细胞、菌体和其他悬浮颗粒后得到的液体。
3. 3 发酵菌体bacterialcells 发酵液（3.1）经离心或过滤后的沉淀部分，为发酵液中的微生物细胞。
4原理 试样中的麦角硫因经热水提取或直接稀释，定容过滤后，利用高效液相色谱仪经亲水反相色谱柱分 离后，用紫外检测器检测，外标法定量。
5试剂和材料 5.1水：GB/T6682，一级水。
5.2乙晴：色谱纯。
5.3乙晴溶液：量取乙晴3mL，加水至100mL 5.4麦角硫因标准品（CgHisN:OS，CAS：497-30-3）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质 证书的标准物质。
QB/T 8140-2025 5.5麦角硫因标准储备液（1.0mg/mL）：称取麦角硫因标准品0.1g，精确至0.0001g，加水溶解并 定容至100mL.0°℃~4C冷藏保存，有效期3个月。
5.6麦角硫因标准系列工作液：分别移取麦角硫因标准储备液1mL、2mL、4mL、6mL、8mL、10mL， 分别加水定容至100mL，混匀。
麦角硫因标准系列工作液的质量浓度分别为10ug/mL、20ug/mL、 40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100 μg/mL。
0°C~4C冷藏保存，临用现配。
6仪器和设备 6.1分析天平：感量为0.0001g和0.00001g 6.2具塞锥形瓶：150mL。
6.3水溶恒温磁力搅拌器：20°C~100°C可调，搅拌转速50r/min~500r/min可调。
6.4离心管：10mL。
6.5离心机：转速500r/min~5000r/min可调。
6.6微孔滤膜：0.22μm，水相。
6.7高效液相色谱仪：配紫外检测器。
7分析步骤 7.1试样溶液的制备 7.1.1发酵液 量取充分混匀的发酵液1mL置于150mL具塞锥形瓶中，加水至约60mL，制成菌体悬液。
置于95℃ 水浴中，以200r/min转速搅拌提取30min后，冷却至室温，将该提取液加水定容至100mL，摇匀，微 孔滤膜过滤。
此提取液应经适当的稀释，使麦角硫因质量浓度在标准曲线范围内。
7.1.2发酵清液 量取充分混匀的发酵液适量置于10mL离心管中，5000r/min离心10min后，吸取上清液1mL置于 100mL容量瓶中，用水定容至100mL，摇匀，微孔滤膜过滤。
此发酵清液的麦角硫因质量浓度应在标 准曲线范围内。
7.1.3发酵菌体 量取充分混匀的发酵液1mL置于10mL离心管中，5000r/min离心10min后倒出上清液，用约60mL 水将离心管中剩余的菌体完全洗入150mL具塞锥形瓶中，制成菌体悬液。
将菌体悬液置于95°℃水浴中， 以200r/min转速搅拌提取30min后，释放细胞内麦角硫因，冷却至室温，将该提取液加水定容至100mL， 摇匀，用微孔滤膜过滤。
此提取液应经适当的稀释，使麦角硫因质量浓度在标准曲线范围内。
7.2液相色谱参考条件 7.2.1色谱柱：SB-Aq，250mm×4.6mm×5gum，或等效的亲水柱。
7.2.2柱温：30°℃。
7.2.3检测波长：257mm 7.2.4流动相：乙睛溶液。
7.2.5流速：0.7mL/min。
7.2.6进样量：10μL。
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