中华人民共和国国家标准
GB/T15670.15-2017部分代替GB/T15670-1995
农药登记毒理学试验方法 第15部分：体内哺乳动物骨髓嗜多染 红细胞微核试验
Toxicological test methods for pesticides registration-Part 15: In vivo mammalian bone marrow polychromatic erythrocytemicronucleus test
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
GB/T15670《农药登记毒理学试验方法》分为以下部分：
第1部分：总则：第2部分：急性经口毒性试验霍恩氏法；第3部分：急性经口毒性试验序贯法； 第4部分：急性经口毒性试验概率单位法；第5部分：急性经皮毒性试验；-第6部分：急性吸人毒性试验；第7部分：皮肤刺激性/腐蚀性试验；第8部分：急性眼刺激性/腐蚀性试验； 第9部分：皮肤变态反应（致敏）试验：第10部分：短期重复经口染毒（28天）毒性试验：第11部分：短期重复经皮染毒（28天）毒性试验；第12部分：短期重复吸人染毒（28天）毒性试验；第13部分：亚慢性毒性试验； 第14部分：细菌回复突变试验；一第15部分：体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验；-一第16部分：体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验；第17部分：哺乳动物精原细胞/精母细胞染色体畸变试验； 第18部分：嘀齿类动物显性致死试验：第19部分：体外哺乳动物细胞染色体畸变试验：第20部分：体外哺乳动物细胞基因突变试验：第21部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS）试验：第23部分：致畸试验； 第22部分：体外哺乳动物细胞DNA损害与修复/程序外DNA合成试验：第24部分：两代繁殖毒性试验；第25部分：急性迟发性神经毒性试验；第26部分：慢性毒性试验；第27部分：致癌试验； 第28部分：慢性毒性与致癌合并试验；第29部分：代谢和毒物动力学试验.本部分为GB/T15670的第15部分.本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本部分部分代替GB/T15670-1995《农药登记毒理学试验方法》.修改和调整了标准的总体结构和编排格式；增加了一些章节内容（见第1章、第2章、第3章、第4章、第5章、7.1和第8章）；一修改了剂量和分组的内容（见6.3，1995年版的14.4.3）； 修改了对实验动物的要求（见6.2，1995年版的14.4.1）；
GB/T 15670.15-2017
一修改了染毒方式内容（见6.4，1995年版的14.4.3）；修改了阅片的内容（见6.7，1995年版的14.4.4.4）.本部分由中华人民共和国农业部提出并归口.本部分起草单位：农业部农药检定所.本部分主要起草人：肖杭、环飞、张丽英、陶传江. 本部分所代替标准的历次版本发布情况为：*GB/T 156701995
农药登记毒理学试验方法 第15部分：体内哺乳动物骨髓嗜多染 红细胞微核试验
1范围
GB/T15670的本部分规定了体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验的基本原则、方法和要求.本部分适用于为农药登记面进行的体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB14925实验动物环境及设施
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3.1
微核micronucleus
在细胞有丝分裂后期，不能进入子代细胞核中的染色体的断片或迟滞的染色体，在子代细胞胞浆内形成的一个或儿个次核，其与细胞主核着色一致，呈网形或椭圆形.
3.2
嗜多染红细胞polychromatic erythrocytes：PCE
未成熟红细胞，是红细胞成熟过程中的一个中间阶段，此时因胞质内仍含有核糖体保持其嗜碱性约24h，可通过选择性的染色而与成熟红细胞区别开来.
3.3
正染红细胞normochromaticerythrocytes:NCE
成熟红细胞，因其核糖体消失，可通过选择性的染色而与未成熟红细胞区别开来.
4试验目的
增高，以评价受试物致突变的可能性. 检测受试物是否引起哺乳动物骨髓嗜多染红细胞染色体或有丝分裂器损伤而诱导微核细胞发生率
5试验概述
微核是指细胞中主核之外的小核，染色与细胞核一致，相当于细胞直径的1/20~1/5，呈圆形或椭圆形.微核是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂时滞留在胞核外的遗传物质.因
而，微核试验能检测化学或/和其他物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点.
微核可出现于多种细胞，但在有核细胞中难与正常核的分叶及核突出物区分，故常计数嗜多染红细胞（PCE）中的微核，因为红细胞在成熟之前最后一次分裂后数小时将主核排出，但仍保留微核于嗜多染红细胞中.
6试验方法
6.1受试物及仪器试剂
6.1.1受试物配制
首选蒸馏水作溶剂，如受试物不溶于水，可用食用油、食用淀粉、0.5%羧甲基纤维素钠配成乳浊液或悬浊液，受试物应于滥胃前新鲜配制，除非有资料表明以溶液（或乳浊液、悬浊液）保存具有稳定性.如不是常用溶剂，应有参考资料并说明其成分及选做溶剂的原因.
6.1.2夜器及其他试剂
6.1.2.1仪器：生物显微镜、恒温水浴箱等.
6.1.2.2小牛血清（灭活）：小牛血清滤菌后置于56C恒温水浴保温30min进行灭活，灭活的小牛血 清通常贮存于4℃冰箱.亦可用大、小鼠血清代替.
6.1.2.3姬娜萨（Giemsa）染液：
姬娜萨（Giemsa）染料 3.8 g甲醇 375 mL甘油 125 mL
配制：将姬姆萨（Giemsa）染料和少量甲醇置于研体里仔细研磨，再加人甲醇到375mL，待完全溶解后，再加人125mL甘油，混合均匀.置37C恒温箱中保温48h.保温期间振摇数次，促使染料充分溶解.取出过滤，两周后使用.
6.1.2.4磷酸盐缓冲液（pH6.8）：
1/15mol/L磷酸氢二钠溶液：称取NaHPO 9.47g溶于1000mL蒸馏水中.
1/15mol/L磷酸二氢钾溶液：称取KHPO 9.07g溶于1000mL蒸馏水中.
将磷酸氢二钠溶液50mL与磷酸二氢钾溶液50mL混合用pH计测定并调节至pH6.8.
6.1.2.5姬姆萨（Giemsa）应用液：取1份姬娜萨（Giemsa）染液与6份磷酸盐缓冲液（pH6.8）混合而成，临用时配制.
6.1.2.6甲醇（分析纯）.
6.2实验动物
6.2.1动物选择
微核试验推荐使用小鼠，也可选用大鼠.通常用7周～12周，体重25g～30g的小鼠或体重150g~200g的大鼠.动物随机分组，每组用两种性别的动物至少各5只.在试验开始时，动物体重差异应不 超过同性别平均体重的土20%.
6.2.2饲养环境
规定， 试验前，动物应在何养环境中检疫、适应3d～5d，实验动物饲养环境应符合GB14925的有关
