中华人民共和国国家标准
GB/T22101.1-2008
Technical specification for evaluating resistance ofcotton to disease and insect pests-Part 1:Cotton bollworm
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
GB/T22101《棉花抗病虫性评价技术规范》分为以下五部分：
一第1部分：棉铃虫；
一第2部分：棉蚜；
一第3部分：红铃虫；
第4部分：枯萎病；
第5部分：黄萎病.
本部分是GB/T22101的第1部分.
本部分的附录A、附录B为资料性附录.
棉花抗病虫性评价技术规范 第1部分：棉铃虫
1范围
GB/T22101的本部分规定了转基因棉花、杂交棉花和常规棉花抗棉铃虫性鉴定方法和抗虫性评价标准.和抗虫性评价.
本部分适用于棉花育种、棉花生产和植保单位对转基因棉花、杂交棉花和常规棉花抗棉铃虫性鉴定
2术语和定义
下列术语和定义适用于GB/T22101的本部分.
幼虫死亡率larvalmortality
棉铃虫幼虫取食棉花后死亡幼虫数占供试幼虫总数的百分率.
棉铃虫幼虫危害棉花蕾铃数占棉花植株蕾铃总数的百分率.
2.3初孵幼虫neonate刚从卵中孵化出的棉铃虫幼虫.
2.4双重mpetri dish
大小一致的培养Ⅲ相对扣在一起.
2.5标准感虫棉花品种cotton cultival for susceptibility to cotton bollworm棉铃虫幼虫取食供试棉叶状况达到4级的非转基因相同棉种的棉花品种.
3供试棉铃虫的饲养
3.1饲养棉铃虫的基本设施和条件
具有调温和光照设备的养虫室，温度保持在25C～28C之间和保证≥14h光照时间.培养Ⅲ（直径9cm）、养虫管（直径2.5cm.高8cm）、养虫架、饲喂幼虫的人工饲料（人工饲料配制参见附录A和附录B）.饲养成虫用铁纱笼、钞布、剪子、镊子、毛笔等养虫用具和存放饲料的冰箱及操作台.
3.2棉铃虫成虫饲养
覆盖纱布，使雌蛾产卵于纱布上. 将羽化后的雌、雄成虫混合放入铁纱笼内，饲喂以5%蔗糖水或蜂蜜水，由其自由交配，在铁纱笼上
3.3卵的处理
将同日产卵的纱布放在同一培养Ⅲ内，然后放在养虫室的养虫架上，等待卵的孵化.
GB/T 22101.1-2008
3.4幼虫饲养
孵化后幼虫接在人工饲料上，刚孵化幼虫用培养血集体饲养，2龄～3龄后分管单虫饲养.
3.5供鉴定用棉铃虫
幼虫. 室内鉴定用孵化后在人工饲料上饲养2d的1龄幼虫.网室鉴定用棉铃虫成虫和卵或初孵
3.6对照材料
3.6.1转基因棉花鉴定以对应的非转基因棉花受体亲本为对照.3.6.2转基因杂交棉花鉴定以对应的非转基因亲本为对照.3.6.4常规棉花鉴定以标准感虫棉花为对照. 3.6.3常规杂交棉花鉴定以标准感虫棉花为对照.
4转基因棉花植株抗棉铃虫性室内鉴定
4.1供试棉叶
供试转基因棉株的叶片为从植株顶部展开的第3片棉叶.
4.2供试棉铃虫
1龄幼虫，即从卵孵化后在人工饲料上饲养2d的幼虫.
4.3鉴定方法
4.3.1双重皿集体饲虫
滤纸，用小湿棉球包紧叶柄底部，保持棉叶在供试期内不干.接虫后用纸条或封口膜将双重Ⅲ封严，防 将棉叶放在双重Ⅲ内（大叶放1片，小叶放2片），每Ⅲ接1龄幼虫8头，重复3次，皿底放置1张湿止幼虫逃逸和保持Ⅲ内湿度.放入25C～28C的养虫室或培养箱中饲养.
4.3.2分管单头饲养
将碎叶块放在管内，每管接1头1龄幼虫，每处理接24管.放人25C～28C的养虫室或培养箱中饲养.
4.4鉴定结果调查
调查2次，第1次调查在接虫后第3天，第2次调查在第6天，调查记录内容如下.
4.4.1幼虫死亡状况
统计幼虫死亡数和活虫数，计算幼虫死亡率.需继续观察时将死亡虫挑出累计.
4.4.2幼虫取食状况
片上有一些被食孔但不多，记为"十十”即为2级；叶片上有许多被食孔但未出现大片叶片被食缺口，记 以目测分4个等级：叶片未取食或取食很少（叶片被食的小孔或痕迹很少）记为"十”，即为1级；叶为”十十十”，即为3级；叶片大部被食或所剩无几为大量取食，记为”十十十”，即为4级.
4.4.3幼虫生长状况
常生长记为"十”.另外，可用分析天平（精确度1mg）称幼虫体重并计算各处理平均单头幼虫体重.以 幼虫体重比较幼虫生长情况.
4.5鉴定结果计算与分析
每次鉴定均须设置非转基因棉株为对照.若对照组幼虫死亡率在5%以上，处理组的幼虫死亡率需要进行校正.若对照组死亡率超过20%，则需要分析原因，重新进行试验.幼虫校正死亡率m，数值以%表示，按式（1)计算：
式中：
m处理组幼虫死亡率；
m对照组幼虫死亡率.
计算结果精确到小数点后一位.
以幼虫校正死亡率、取食量（棉花被害程度）和幼虫生长发育情况综合评价转基因棉株对棉铃虫有无抗虫性和抗虫性程度.
5棉花品种抗棉铃虫性田间网室鉴定
5.1鉴定方法
采用罩笼接虫法，通过对棉株受害调查，以蕾铃受害率与对照品种相比较评价鉴定材料的抗虫性级别.
5.2田间罩笼设计
有保护行.罩笼内棉花栽培方式同大田，苗期可以防治棉蚜，防治棉蚜药剂不可影响后期棉铃虫的存 罩笼高1.8m，面积在50m²以上，每品种25株，不设重复，以HG-BR-8为对照品种，罩笼四周设活，后期不防治棉铃虫.
5.3供试虫源和接虫量
供试昆虫为采自田间并经室内饲养的棉铃虫成虫，在养虫笼内任其自由交配，并喂以5%的蜂蜜水.3d后选择活动力强的成虫释放于种植鉴定材料的罩笼内.接虫量为每10m²4对（雌雄比1：1)卵，每株补足5粒卵，补接的卵粒用稀浆糊粘接在棉株顶部.接卵时期与棉田2代棉铃虫的发生期一致，棉花生育期为现蕾或开花结铃期.
5.4调查方法
害株数（以生长点受害为准），分别计算蕾铃受害百分率和顶尖受害率，并计算两次调查的均值. 接虫后第7天至第10天和第15天至第20天分两次调查各材料的被害蕾铃数、健蓄铃数和顶尖受
5.5调查结果计算
5.5.1蕾铃（顶尖）受害率d，数值以%表示，按式（2）计算：
式中：
n-调查棉株蕾铃（顶尖）被害数；n-调查棉袜蕾铃（顶尖）总数.计算结果精确到小数点后两位.
5.5.2蕾铃（顶尖）受害减退率X，数值以%表示，按式（3）计算：
..(3)
式中：
d-对照品种蓄铃（顶尖）受害率；d-鉴定材料蕾铃（顶尖）受害率.
计算结果精确到小数点后两位.
6抗虫性评价和分级
根据田间网室和室内抗虫性鉴定结果进行鉴定材料抗虫性综合评定，并按照表1评价棉花材料抗棉铃虫的级别.
