中华人民共和国国家标准
GB/T22987-2008
牛奶和奶粉中呋喃它酮、呋喃西林、 呋喃妥因和呋喃唑酮代谢物 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
Determination for the residues of furaltadon.nitrofurazone nitrofurantoin and furazolidone metabolites in milk and milk powderLC-MS-MSmethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B和附录C为资料性附录.本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局.本标准主要起草人：张进杰、曹亚平、刘晓茂、曹彦忠、王静淑、杨志伟、庞国芳.
牛奶和奶粉中呋喃它酮、呋喃西林、 呋喃妥因和呋喃唑酮代谢物 液相色谱-串联质谱法 残留量的测定
1范围
本标准规定了牛奶和奶粉中呋嘀它酮代谢物（5-吗啉甲基-3-氨基-2-呕唑烷基酮，英文缩写为AMOZ)、呋确西林代谢物（氨基脲，英文缩写为SEM）、呋确妥因代谢物（1-氨基-2-内酰脲，英文缩写为AHD）和呋哺唑酮代谢物（3-氨基-2-呕唑烷基酮，英文缩写为AOZ）残留量液相色谱-中联质谱测定 方法，
本标准适用于牛奶和奶粉中AMOZ、SEM.AHD和AOZ残留量的测定.
本标准的方法检出限：牛奶中AMOZ、SEM、AHD和AOZ的检出限均为0.2pg/kg：奶粉中AMOZ、SEM、AHD和AOZ的检出限均为1.6μg/kg.
注：本标准中味响它酮，映暗西林、呋响妥因和呋响唑酮及代谢物中英名称及英文缩写参见附录A中的表A.1.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379. 12004 ISO 5725-1;1994 IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，ISO5725-2：1994，IDT)
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，1SO3696：1987，MOD）
3原理
化，用OasisHLB或性能相当的固相萃取柱净化.液相色谱-中联质谱仪（ESI）检测.用内标法或外 牛奶或奶粉试样用三氯乙酸水解并脱蛋白，硝基呋确类代谢物在酸性条件下用2-硝基苯甲醛衍生标法定量.
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为优级纯.
4.1水：GB/T6682，一级.4.2甲醇：色谱纯.4.3乙晴：色谱纯.4.4乙酸乙酯：色谱纯.4.5磷酸氢二钾，KHPO 4.6乙酸.4.7二甲亚祺.
4.8盐酸.4.9三氯乙酸.CHCIO4.10氢氧化钠. 4.112-硝基苯甲醛（2-NP)，C HNO：含量≥99%.4.120.1mol/L磷酸氢二钾溶液：称取17.4g磷酸氢二钾（4.5），用水溶解，定容至1000ml.4.130.2mol/L盐酸：量取17m1浓盐酸（4.8），用水定容至1000mL.4.144mol/1氢氧化钠溶液：称取80g氢氧化钠（4.10），用水溶解，定容至500mL.4.150.5mol/L三氧乙酸溶液：称取37.5g三氯乙酸（4.9），用水溶解，定容至500mL. 4.16衍生剂：含2-硝基苯甲醛0.05mol/L，称取0.075g2-硝基苯甲醛（4.11）溶于10mL二甲亚矾(4.7）.规用现配.4.17样品定容溶液：取10mL乙晴（4.3），0.3mL乙酸（4.6）.用水稀释到100mL.4.18标准物质：AMOZ（CAS：43056-63-9)、SEM（CAS:563-41-7)、AHD（CAS:2827-56-7)和AOZ(CAS：80-65-9），纯度均≥99%. 4.19同位素标记物标准物质：D-AMOZ、CN-SEM、C-AHD和D-AOZ.四种内标标准物质的纯度均≥99%4.201.0mg/mL标准储备溶液：分别称取适量的四种硝基映响代谢物标准物质（4.18），分别用甲醇稀释成1.0mg/mL的标准储备溶液.避光保存于-18C冰柜中.4.210.1μg/mL混合标准溶液：分别吸取适量四种硝基呋确代谢物的标准储备溶液（4.20），用甲醇 稀释成0.1μg/mL的混合标准溶液，避光保存于-18C冰柜中.4.221.0mg/mL同位素标记物混合内标储备溶液：分别称取适量的四种硝基映响代谢物的同位素标记物标准物质（4.19），分别用甲醇配成1.0mg/mL的标准储备液.避光保存于一18C冰柜中.4.230.1μg/mL同位素标记物混合内标溶液：分别移取适量的四种硝基味响代谢物的同位素标记物内标储备溶液（4.22），用甲醇稀释成0.1μg/mL的混合内标标准溶液，避光保存于-18C冰柜中. 4.24OasisHLB固相萃取柱或相当者：60mg，3mL.使用前依次用5mL甲醇和10mL水预处理，保持柱体湿润.4.25滤膜：0.2 um.
5仪器
5.1液相色谱-中联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源.5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g.5.3液体混匀器.5.4固相萃取装置. 5.5氮气吹干仪.5.6恒温振荡水浴.5.7真空泵：真空度应达到80kPa5.8微量注射器；25yL 100pl.5.9棕色具塞离心管：25ml.50mL. 5.10pH计：测量精度士0.02pH单位.5.11贮液器：50mL.
5.12高速离心机：转速10000r/min以上.
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
实验室样品混合均匀，分出0.5kg作为试样.
6.2试样保存
试样置于一18C冰柜，避光保存.
7测定步骤
7.1待测样品溶液的制备
7.1.1牛奶样品脱蛋白、水解和衍生化
向上述离心管中加入0.2mL衍生剂（4.16），再加人适量混合内标溶液（4.23）.使四种硝基呋确代谢物内标物最终定容浓度均为2.0ng/mLl.用液体混匀器混匀，置于37C恒温振荡水浴中避光反应16h.离心管取出后放置至室温，在10000r/min下离心10min，上清液倒人另一棕色离心管中.
7.1.2奶粉样品脱蛋白、水解和衍生化
15mL三氯乙酸溶液（4.15），向上述离心管中加入0.2mL街生剂（4.16）.再加人适量混合内标溶液 称取奶粉样品1g（精确到0.01g），置于50mL棕色离心管中，加人8mL水，涡旋混合后，再加人（4.23），使四种硝基呋确代谢物内标物最终定容浓度均为2.0ng/mL.用液体混匀器混匀，置于37C恒湿振荡水浴中避光反应16h.离心管取出后放置至室温，在10 000r/min下离心10min，上清液倒人另一棕色离心管中.
7.1.3样品溶液净化
上述衍生溶液加人5mL0.1mol/1磷酸氢二钾溶液（4.12)，用4mol/L氢氧化钠溶液（4.14）调节萃取柱（4.24）15min.用5mL乙酸乙酯（4.4）洗脱，收集洗脱液于25mL棕色离心管中，在氮气吹干供液相色谱-串联质谱测定.
溶液pH约为7.4，在10000r/min下离心10min，上清液倒人下接OasisHLB固相萃取柱（4.24）的贮液器中，在固相萃取装置上使样液以小于2mL/min的流速通过OasisHLB固相萃取柱（4.24），待样液全部通过固相萃取柱后用20mL20%甲醇水淋洗固相萃取柱，弃去全部流出液.抽干OasisHLB固相
7.2混合基质标准校准溶液的制备
7.2.1牛奶混合基质标准校准溶液的制备
称取五个阴性牛奶样品，每个样品为8g（精确到0.01g）.分别加人适量混合标准溶液（4.21），制成四种硝基映响代谢物含量均为0.1μg/kg、0.2μg/kg、0.5μg/kg、1.0μg/kg和2.0μg/kg的基质标准溶液，再分别加人适量混合内标溶液（4.23），含量均为2.0ng/mL.同7.1.1和7.1.3操作，作为牛奶标准校准曲线.
7.2.2奶粉混合基质标准校准溶液的制备
称取五个阴性奶粉样品，每个样品为1g（精确到0.01g）.分别加人适量混合标准溶液（4.21），制成四种硝基映晴代谢物含量均为0.8μg/kg、1. 6μg/kg、4.0μg/kg、8.0μg/kg和16.0μg/kg的基质标准溶液，再分别加人适量混合内标溶液（4.23），含量均为2.0ng/mL.同7.1.2和7.1.3操作，作为奶粉标准校准曲线.
7.3测定条件
7.3.1液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
