ICS 11. 040.99
Human testing for cosmetie efficaey
Test method based on two-photon in vivomicroimaging technology
中国轻工业联合会发布
目次
前言 ⅡI1范围2规范性引用文件3术语和定义.4基本要求.5测试原理6受试者的选择-7测试方法-8数据统计.9结果应用- 510试验报告附录A（资料性） 测试仪器运行参数 6附录B（资料性） 皮肤结构图像的标准示例附录C（资料性） 测试指标与结果评估对照.参考文献 01
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由中国轻工业联合会提出并归口.
本文件起草单位：欧诗漫生物股份有限公司、北京颐唯实检测技术有限公司、山西锦波生物医药股份有限公司、诺斯贝尔化妆品股份有限公司、上海家化联合股份有限公司、杭州希科检测技术有限公司、 华测检测认证集团股份有限公司、上海微谱检测科技集团有限公司、北京超维景生物科技有限公司、北京金宏机商贸有限责任公司.
本文件主要起草人：赵瑞丽、范莹、刘琦、冯子然、陈传秀，周大为、邱晓锋、彭心宇、陈默、闫昕宇、王晓、李玉洁、陈映格、王思艺、崔俭杰、刘玉、王俊杰、王芳.
化妆品功效人体测试
基于双光子在体显微成像技术的测试方法
1范围
本文件描述了化妆品功效人体测试中基于双光子在体显微成像技术的测试方法.
基于双光子在体显微成像技术的测试方法参照执行. 本文件适用于化妆品功效人体测试中采用双光子在体显微成像技术开展测试的方法.其他研究领域
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
《化妆品安全技术规范》（2015版）（国家食品药品监督管理总局2015年第268号）
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3. 1
双光子显微成像two-photonmieroscopy
利用聚焦近红外飞秒激光作用于皮肤，从面激发皮肤组织中的双光子荧光信号及二次谐波信号的在体显微成像技术.
3.2
注1：皮肤中弹性纤维是由弹性蛋白和微原纤维组成的结缔组织纤维，是真皮中的一种重要纤维.在真皮乳头内，性纤维在吸收适当波长的光子后，会发生自发发射荧光的现象.其荧光信号由该通道输出，输出深度一般为 弹性纤维呈垂直方向生长直至真表皮交界处，进入到真皮网状层浅层后，其排列与胶原纤维平行或斜行.弹80 μum~120μum（不同测试部位和人群略有不同）.注2：此值表征测试区域内真皮浅层弹性纤维的分布密度.此值越大，说明测试区域的弹性纤维分布密度越高，弹注3：此值无量纲. 性纤维含量越高：反之则越低.
3.3
谐波通道投影面积harmonicchannelprojectionareavalue
皮肤中胶原纤维二次谐波信号的分割投影面积.
注1：皮肤中胶原纤维是真皮中的主要结缔组织纤维，主要由1型胶原构成（少数为Ⅲ型胶原），经多级拓扑结构组装成束，排列紧密且交织成网，因对光产生强烈米氏散射而呈现白色：在真皮层内，胶原纤维主要分布于网状层，部分延伸至乳头层，排列方向与皮肤张力方向一致，承担皮肤支撑、抵抗拉力的核心功能.在聚焦
飞秒激光作用下，胶原纤维会发生非线性光学现象一产生二次谐波信号（频率为入射光频率两倍、波长为入射光波长一半），该信号由谱波通道输出，输出深度一般为80μm~120μum（不同测试部位和人群略有不同）.注2：此值表征测试区域内真皮浅层胶原纤维的分布密度.此值越大，说明测试区域的胶原纤维分布密度越高，胶注3：此值无量纲. 原纤维含量越高：反之越低.
3. 4
皮肤表面至真表皮交界的平均深度.注1：此值越大，说明测试区域的表皮越厚：反之则越小.注2：单位为微米（μm）.
3.5
真表皮交界标准化面积dermal-epidermal junetion index;DEJI
注1：此值越大，说明测试区域的真表皮界面面积越大：反之则越小. 皮肤真表皮交界的表面积与其沿皮肤表面法线方向的投影面积之比.注2：此值无量纲.
3. 6
皮肤老化指数skin aging assessment index;SAAID
皮肤不同深度下皮肤弹性纤维荧光图像与胶原纤维二次谐波图像的强度按照如下运算关系所得比值：
式中：
SHG--胶原纤维； SAAID-皮肤老化指数：AF --弹性纤维.
注1：皮肤中该指数降低时，可能出现胶原流失、弹性纤维断裂，与皮肤松弛、皱纹加深、弹性下降相关：用于辅助评估光老化、自然老化.注2：此值无量纲.
4基本要求
4.1化妆品人体功效评价检验应符合国际赫尔辛基宣言的基本原则，要求受试者签署知情同意书并采 取必要的医学防护措施，最大程度地保护受试者的利益.
4.2被测化妆品应为微生物学指标、有害物质限值和理化指标检验合格的产品，化妆品人体功效检验之前应先完成必要的安全性评价，并出具书面证明，安全性评价不合格的样品不再进行人体功效检验，具体检测方法及合格判断标准均按照《化妆品安全技术规范》（2015版）中的要求执行.
5测试原理
双光子显微成像技术利用显微物镜将百飞秒量级的近红外激光脉冲聚焦至样本内，在焦点处的荧光分子发生双光子吸收面跃迁至高能级，在返回基态的过程中放出荧光光子.在扫描系统的控制下，激光 对样本进行X、Y、Z三轴扫描，记录每一个像素点的灰度值信息，从而实现三维空间（3D）层析成像.
