中华人民共和国国家标准
GB/T 30987-2020 代GB/T30987-2014
植物中游离氨基酸的测定
Determination of free amino acids in plant
国家标准化管理委员会 国家市场监督管理总局 发布
目次
前言1范围2规范性引用文件3术语和定文4全自动氨基酸分析仪法（第一法）5高效液相色谱法（第二法）6液相色谱-串联质谱法（第三法）附录A（资料性附录）氨基酸化合物信息及定量限 附录B（资料性附录）21种氨基酸混合标准工作溶液色谱图 13附录C（资料性附录）液相色谱-串联质谱参数参考条件18
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准代替GB/T30987-2014植物中游离氨基酸的测定》.本标准与GB/T30987-2014相比，主要技术变化如下：修改了方法灵敏度的表示方式（见4.5.5.6、5.5.6.4，2014年版的4.10、5.10）. 增加了液相色谱-串联质谱法（见第6章）；本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）提出并归口本标准起草单位：中国测试技术研究院生物研究所、中国测试技术研究院、河北省食品检验研究院.本标准主要起草人：李怀平、唐祥凯、杨杰斌、邹燕、赵爱平、吴微、张岩. 本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T 30987-2014.
植物中游离氨基酸的测定
1范围
本标准规定了植物中游离氨基酸含量的测定方法，包括全自动氨基酸分析仪法（第一法）高效液相色谱仪法（第二法）和液相色谱-串联质谱法（第三法）三种方法.
本标准适用于茶叶、中药材、烟叶等植物样品中21种游离氨基酸（丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、胱氨酸、Y-氨基丁酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、茶氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缴氨酸）的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T8303-2013茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3.1
游离氨基酸free amino acids
植物中未与其他化学物质结合，以单个分子或离子形式存在，可被水溶液或其他溶剂直接浸提出来的氨基酸.
4全自动氨基酸分析仪法（第一法）
4.1原理
样品中游离氨基酸经沸水提取后，经氨基酸分析仪的磺酸型阳离子交换柱分离后，在135C下加热，氨基酸与三酮混合反应，伯胺与带三酮生成蓝紫色化合物，仲胺与带三酮生成黄色化合物，分别在 570nm和440nm波长下通过可见光分光光度检测器检测两种衍生产物，保留时间定性，外标工作曲线法定量.
4.2试剂或材料
除另有规定外，本方法所用试剂均为优级纯.水为符合GB/T6682规定的一级水.
4.2.1柠檬酸锂（四水）.4.2.2氯化锂.4.2.3柠檬酸.4.2.4氢氧化锂. 4.2.5硼氢化钠.
GB/T 30987-2020
4.2.6无水乙酸钠.4.2.7萌三酮.4.2.8无水乙醇.4.2.9硫代双乙醇.4.2.11辛酸. 4.2.10聚氧乙烯月桂醚，4.2.12苯甲醇.4.2.13乙二醇甲醚.4.2.15氨基酸标准品：丙氨酸（Ala）、精氨酸（Arg）、天冬酰胺（Asn）、天冬氨酸（Asp）、胱氨酸（Cys）、 4.2.14冰乙酸.y-氨基丁酸（GABA）、谷氨酰胺（Gln）、谷氨酸（Glu）、甘氨酸（Gly）、组氨酸（His）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、赖氨酸（Lys）、蛋氨酸（Met）、苯丙氨酸（Phe）、脯氨酸（Pro）、丝氨酸（Ser）、茶氨酸（The）、苏氨酸（Thr）、酪氨酸（Tyr）、氨酸（Val），化合物信息参见附录A中表A.1，纯度均>98%.4.2.16快速定量滤纸. 4.2.170.45μm水相滤膜.4.2.180.45μm有机相滤膜.
4.3仪器设备
4.3.2分析天平：感量0.0001g和0 01mg. 4.3.1氨基酸自动分析仪：配备双通道可见光检测器、六元梯度分离系统和三元反应液输送系统.4.3.340目筛：孔径0.425mm4.3.4移液器：量程分别为10μL~100μL 20μL~200μL及100μL~1000μL
4.4样品
样品按GB/T8303-2013中6.1和6.2规定制样，过40目筛.充分混匀，装人洁净的盛样容器内，作为试样，标明标识，
4.5试验步骤
4.5.1.1混合氨基酸标准储备液配制
称取各氨基酸标准品适量（精确到0.01mg），用水溶解，配制成混合溶液.混合标准溶液中的茶氨1个月. 酸和其他20种氨基酸的浓度分别为5.00pμmol/mL和1.25μmol/mL.储备溶液冷冻保存有效期为
4.5.1.2混合氨基酸标准工作液配制
准确吸取2mL混合氨基酸标准储备液至5mL容量瓶中，用水稀释定容至刻度，混匀，即得到第一份标准溶液.将第一份标准溶液用水逐级稀释，制成总共7个不同浓度的系列混合标准工作溶液.500.00 nmol/mL 1 000. 00 nmol/mL 和 250. 00 nmol/mL 500. 00 nmol/mL 和 125 00 nmol/mL 250.00 nmol/ mL和l 62.50 nmol/ mL 125.00 nmol/ mL 和I 31.25 nmol/ mL 62.50 nmol/ mL 和I 15.63 nmol/ mL 31.25 nmol/mL和 7.81 nmol/mL，现配现用
