PCR-based method for sex determination of Crested lbis
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由浙江农林大学提出.
本文件由中国兽医协会归口.
本文件起草单位：浙江农林大学、德清县生态林业综合服务中心、湖州市生态林业保护研究中心.本文件主要起草人：牛冬、马翔、宋厚辉、杨永春、邱国强、石坚、费群伟、白洪青、姚可佩.
朱性别鉴定的PCR检测方法
1范围
本文件规定了朱鸭（Crestedibis）性别鉴定的鉴定流程及要求等内容.本文件适用于朱鸭的性别鉴定.
2规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件.
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4缩略语
下列缩略语适用于本文件.DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）PCR：聚合酵链式反应（Polymerase chain reaction）dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（Deoxy-ribonucleoside Triphosphate）
5仪器
电子天平、恒温水浴锅、超纯水仪、微量移液器（量程分别为2uL、20uL、200uL、1000uL）、冷冻离心机（最大离心力10000g以上）、PCR仪、微量分光光度计、掌上离心机、电泳仪、凝胶成像 系统.
6试剂与耗材
液、酚-氯仿-异戊醇混合液（体积比25:24:1）、氯仿-异戊醇混合液（体积比24:1）、3M醋酸钠（pH5.2）、 去离子水、DNAMarker、2xGrcenTaq Mix（含Taq酶、dNTP以及缓冲液）、琼脂糖、电泳缓冲无水乙醇或异丙醇，已鉴定的雄性朱鹏和雌性朱鸭样品.电泳缓冲液和3M醋酸钠配方见附录A.
7鉴定流程及要求
7.1引物合成
参考朱鹏W染色体特异序列和12SrRNA基因片段序列（见附录B.1和B.2）设计特异性引物（见附录C），将合成的引物溶于适量去离子水中，使引物终浓度为10uM，分装并在-20℃条件下冷冻保存.
