B 41 ICS 11.220
NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T1471-2017 代替NY/T1471-2007
牛毛滴虫病诊断技术 Diagnostic techniques forbovine trichomoniasis
2017-06-12发布2017-10-01实施
中华人民共和国农业部发布
NY/T 1471-2017
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准代替NY/T1471-2007《牛毛滴虫病诊断技术》。
与NY/T1471-2007相比，除编辑性修 改外，主要技术变化如下： 病原PCR检查时增加了一对可用PCR引物。
本标准由农业部兽医局提出。
本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。
本标准起草单位：南京农业大学、中国动物卫生与流行病学中心。
本标准主要起草人：李祥瑞、徐立新、严若峰、宋小凯、郑增忍。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为： -NY/T 1471-2007。
NY/T 1471-2017
引言 分布，引起牛，尤其是奶牛生殖器官炎症、死胎、流产和不育，可对畜牧业生产造成严重的经济损失。
毛滴虫病是由胎儿三毛滴虫（Tritrichomonasfoetus)寄生于牛生殖道引起的疾病。
该病呈世界性 毛滴虫病被世界动物卫生组织列为通报传染病。
该病主要通过自然交配传播，已染病动物的精液 和污染的器械人工授精也可引起传播。
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NY/T 1471-2017
牛毛滴虫病诊断技术
1范围 本标准规定了牛毛滴虫病的病原显微镜检查技术和聚合酶链反应（PCR)扩增虫体DNA的检测 方法。
本标准适用于牛毛滴虫病的诊断。
2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。
CTAB：hexadecyltrimethylammoniumbromide，十六烷基三甲基溴化铵。
DNA：deoxyribonucleicacid，脱氧核糖核酸。
dNTP：deoxynucleosidetriphosphate，三磷酸脱氧核苷酸。
PBS:phosphatebuffer solution，磷酸盐缓冲液。
PCR:polymerase chainreaction，聚合酶链反应。
Taq酶：Taq DNA polymerase,TaqDNA聚合酶。
4生物安全措施 进行牛毛滴虫病实验室检测时，如显微镜检查、DNA提取等，按照GB19489的规定执行。
5临床诊断 5.1临床症状 5.1.1公牛 公牛很少或没有临床症状发生。
若有症状，主要包括黏液性包皮炎，包皮肿胀，并分泌出大量脓性 物质；包皮黏膜上出现粟粒大的红色结节，有痛感，不愿交配。
5.1.2母牛 母牛出现阴道损伤，卡他性炎症，阴道红肿；黏膜出现粟粒大或更大的小结节，排出黏液性分泌物； 宫颈和子宫内膜出现炎症；随后发生不规则的发情，子宫脱垂、子宫积脓和早期(1周～16周)流产。
5.2结果判定 根据牛交配、人工授精或母牛的生殖系统检查史，公牛具有5.1.1临床表现、母牛具有5.1.2临床 表现时，可判定为疑似牛毛滴虫病。
6实验室诊断 6.1样品的采集与运输
NY/T 1471-2017 6.1.1样品的采集 6.1.1.1母牛 选择发情后1d～2d的母牛，用水将母牛外生殖器洗涤干净。
然后，采用下列任何一种方法采样： 35℃灭菌生理盐水急速注人阴道，以洗涤子宫和阴道壁。
收集洗涤液于离心管中， 1500r/min～2000r/min离心5min后，取沉淀物作为待检样品。
b）取一长30cm、直径0.9cm，并在离一端9cm处弯成150°角的消毒玻璃管，注入1mL～2mL 的30°℃～35°℃灭菌生理盐水，收集母牛子宫颈黏液作为待检样品。
6.1.1.2公牛 首先将公牛外生殖器洗涤干净，吸取5mL~10mL的30℃~35℃灭菌生理盐水注入包皮腔内。
然 2000r/min离心5min后，取沉淀物为待检样品 6.1.1.3精液 取人工采集或融化的冷冻精液1m 6.1.1.4其他 产仔牛、流产牛等可取胎盘液；流产胎牛可取胎儿第4胃的内容物；发瓶可取子宫积脓排出物， 以1500r/min~2000%mim离心5mm后，取沉淀物作为待检样品。
S 注：不同情况下毛滴虫的数量有所不同8d内和新近感染母年子宫里均含有大量虫体。
在感染后12d...
