B 61 ICS 65.020
NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2253--2012
菠萝组培苗生产技术规程 Technical specification for tissue culture of pineapple seedlings
2012-12-07发布2013-03-01实施 中华人民共和国农业部 发布
NY/T2253-2012
前言
本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。
本标准由农业部农垦局提出。
本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：中国热带农业科学院南亚热带作物研究所。
本标准主要起草人：丽梅、赵艳龙、詹儒林、郑良永、张秀梅、吴维军、张家云。
NY/T 2253-2012
菠萝组培苗生产技术规程
1范围 本标准规定了菠萝[Ananasosus（L.）Merr.组培育苗过程中的培养基制备程序、组织培养程 序、炼苗和移栽程序。
本标准适用于菠萝组培苗的生产。
2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 LY/T1882林木组织培养育苗技术规程 3术语和定义 LY/T1882界定的术语和定义适用于本文件。
4培养基制备程序 4.1培养基母液配制及保存 4.1.1母液配制 母液配制所用蒸馏水应符合GB/T6682的规定，各种母液配制所用试剂参见附录A、配制方法见 附录B。
4.1.2母液保存 在培养基母液的容器上应贴上标签，标注名称、浓度、配制日期、有效期和配制人。
铁盐及植物生长 素母液应在棕色容器中避光保存。
各种母液应置于0℃～4℃保存，保存期不超过60d。
发现标签不明 或母液中有沉淀或浑浊现象应停止使用。
4.2培养基配制、灭菌及保存 4.2.1培养基配方 4.2.1.1诱导培养基配方 基本培养基(MS)+6-苄氨基嘌呤（6-BA)1mg/L~3mg/L+萘乙酸（NAA)0.1mg/L~0.3 mg/ L。
4.2.1.2继代培养基配方 基本培养基(MS)+6-苄氨基嘌呤(6-BA)1mg/L~3mg/L。
4.2.1.3生根培养基配方 1/2基本培养基(1/2MS)+6-苄氨基嘌呤(6-BA)1mg/L+萘乙酸(NAA)0.1mg/L~0.5mg/L十吲 哚乙酸(IAA)0.1mg/L~1mg/L。
4.2.2培养基配制 4.2.2.1琼脂和蔗糖溶液配制 用感量0.1g天平分别称取琼脂5.0g～8.0g和蔗糖30.0g。
先用蒸馏水700mL加热、搅拌溶解 琼脂，然后加入蔗糖继续搅拌溶解。
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NY/T 2253-2012 4.2.2.2诱导培养基配制 按附录B吸取母液加人到4.2.2.1，依次加入20mL(B.1)、10mL(B.2)、1mL(B.3)、20mL(B.4)、 1 mL(B.5)、1mL~3 mL(B.6)、0.1mL~1mL(B.8)，再加蒸馏水定溶至1000mL,用0.1mol/L盐酸 (HCI)或0.1mol/L的氢氧化钠(NaOH)调节pH至5.8。
4.2.2.3继代培养基配制 按附录B吸取母液加人到4.2.2.1,依次加人20mL(B.1)、10mL(B.2)、1mL(B.3)、20mL(B.4)、 1 mL(B.5)、1mL~3 mL(B.6)，再加蒸馏水定溶至1000 mL,用0.1mol/L的盐酸(HCI)或0.1mol/L 的氢氧化钠(NaOH)调节pH至5.8。
4.2.2.4生根培养基配制 按附录B吸取母液加人到4.2.2.1,依次加人20mL(B.1)、10mL(B.2)、1mL(B.3)、20mL(B.4)、 1 mL(B.5)、1 mL(B.6)、0.1mL~1 mL(B.7)、0.1mL~0.5 mL(B.8)，再加蒸馏水定溶至1000 mL,用 0.1mol/L的盐酸(HCl)或0.1mol/L的氢氧化钠(NaOH)调节pH至5.8。
4.2.2.5分装 用250mL的培养瓶，每瓶分装33mL～40mL。
4.2.2.6封口 盖好瓶盖或用封口膜封口。
4.2.3培养基灭菌 培养基配制后应在12h内完成灭菌程序。
采用高压蒸汽灭菌，在压力0.105MPa、温度121C条件 下按表1所需时间灭菌。
表1培养基高压蒸汽灭菌所需时间 培养容积灭菌时间 mL min 20~50≥15 75~150≥20 250~500≥25 1000≥30 1 500≥35 2000W40 4.2.4培养基保存 灭菌后的培养基应注明培养基编号及配制日...
