ICS11.220 B41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T572-2016 代替NY/T572一2002 兔病毒性出血病血凝和血凝抑制试验方法 Haemagglutination and haemagglutination inhibition tests for rabbit haemorrhagic disease 2016-10-26发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T572-2016 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准代替NY/T572一2002《兔出血病血凝和血凝抑制试验方法》.与NY/T572一2002相比， 除编辑性修改外，主要技术变化如下： 一修改了微量血凝试验中V型微量滴定板中加入PBS的孔数（见6.1），修改了V型微量滴定板 第11孔的加入样品（见6.4）； ——修改了玻片血凝法的取样方法和检测方法（见7）； 一参考OIE《陆生手册》删除了微量血凝抑制试验检测兔病毒性出血病病毒的方法(2002年版 2.3); 一增加了用于检测兔病毒性出血病病毒抗体的微量血凝抑制试验（见8）. 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口. 本标准起草单位：江苏省农业科学院兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心. 本标准主要起草人：王芳、魏后军、宋艳华、范志宇、胡波、魏荣、孙映雪、徐为中. 本标准的历次版本发布情况为： —NY/T572—2002. I NY/T572-2016 兔病毒性出血病血凝和血凝抑制试验方法 1范围 本标准规定了兔病毒性出血病病毒血凝和血凝抑制试验方法的技术要求. 本标准适用于兔病毒性出血病病毒的鉴定和抗体检测. 2试剂 2.1PBS(0.1mol/L pH7.0~7.2) 见 NDARD 2.2阿氏液(Alsever's) 见A.2 3材料 3.1重组VP60抗原的制备 见附录B. PUBLISHING RES 3.2兔病毒性出血病死亡兔、待检兔和健康兔肝脏悬液的制备 分别将肝脏剪碎，按1：10加人PBS后匀浆，再以1000xg离心30min 取上清液备用. 3.3抗原工作液的制备 根据测定的重组P60抗原和/或兔病毒性出血病死亡兔肝脏悬液的红细凝集效价，用PBS稀 释成4个血凝单位的抗原工作液. 3.41%人“0”型红细胞悬液的制备 取新鲜人“0”型红细胞于阿氏液中保存置2℃~8（可保存7d.用时取人“0”型红细胞以20倍 量PBS混匀洗涤红细胞，400Xg离心5mi 弃上清，重复洗涤4.最后次离心前，计算红细胞悬液 体积（在离心后扣减去上清液的体积，即为红细胞的体积）.洗涤后的红细胞用PBS配成1%悬液，置 2℃~8℃备用. 3.5血清及其处理 3.5.1兔病毒性出血病阴性血清、兔病毒性出血病阳性血清及待检血清 m 3.5.2血清处理法：取血清100ul 56℃水浴灭活30min 加 人 L人“O”型红细胞（按照人 “O”型红细胞与血清为110的比例加人)，混匀，2℃~8℃作用1h 以400Xg离心5min 收集上清 待检. 4仪器设备 4.1离心机：要求最大离心力在12000×g以上： 4.2温箱：(37士1)℃. 4.3恒温水浴锅. 4.42℃~8℃冰箱. 4.5微量移液器(0.5L~10L 2gL~20gL 20L~200gL 100guL~1000gL). 4.6微型振荡器. 5微量血凝试验（用于检测兔病毒性出血病病毒抗原） 5.1在96孔V型微量凝集板上，从第2孔至第10孔，每孔加入25μLPBS. 1 ...
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