中华人民共和国国家标准
GB5009.83-2016
食品安全国家标准 食品中胡萝卜素的测定
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局 发布
前言
GB/T5009.83-2003《食品中胡萝卜素的测定》和NY/T82.15-1988《果汁测定方法3-胡萝卜素的 本标准代替GB5413.35-2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中3-胡萝卜素的测定》、测定》.
本标准与GB5413.35-2010相比，主要变化如下：
标准名称修改为“食品安全国家标准食品中胡萝卜素的测定”：增加了需要区分a-胡萝卜素、3-胡萝卜素的色谱条件； 增加了普通食品的前处理方法；修改了胡萝卜素的结果表达.
食品安全国家标准
食品中胡萝卜素的测定
1范围
本标准规定了食品中胡萝下素的测定方法.食品中3-胡萝卜素的测定. 本标准色谱条件一适用于食品中a-胡萝卜素、3-胡萝卜素及总胡萝卜素的测定，色谐条件二适用于
2原理
法定量. 试样经皂化使胡萝卜素释放为游离态，用石油醚萃取二氯甲烷定容后，采用反相色谱法分离，外标
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1a-淀粉酶：酶活力≥1.5U/mg.3.1.2木瓜蛋白酶：酶活力≥5U/mg.3.1.4无水硫酸钠（NaSO ）. 3.1.3氢氧化钾（KOH）.3.1.5抗坏血酸（CHO）.3.1.6石油醚：沸程30C~60℃.3.1.7甲醇（CHO)：色谱纯.3.1.8乙睛（CHN)：色谱纯. 3.1.9三氯甲烷（CHCI）：色谱纯.3.1.10甲基叔丁基醚[CHOC（CH）]：色谱纯.3.1.11二氯甲烷（CHCL）：色谐纯.3.1.12无水乙醇（CHO）：优级纯.3.1.13正已烷（CH）：色谱纯. 3.1.142，6-二叔丁基-4-甲基苯酚（CHO，BHT）.
3.2试剂配制
氢氧化钾溶液：称固体氢氧化钾500g，加人500mL水溶解.临用前配制.
3.3标准品
3.3.1α-胡萝卜素（C.HCAS号：7488-99-5）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标
准物质.3.3.2β-胡萝卜素（CH，CAS号：7235-40-7）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.
3.4标准溶液配制
3.4.1α-胡萝卜素标准储备液（500μg/mL）：准确称取a-胡萝卜素标准品50mg（精确到0.1mg）.加人0.25gBHT，用二氯甲烷溶解，转移至100mL棕色容量瓶中定容至刻度.于一20C以下避光储存，使用期限不超过3个月，标准储备液用前需进行标定，具体操作见附录A.
3.4.2a-胡萝卜素标准中间液（100yg/mL）：由e-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0mL溶液于50mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷定容至刻度.
3.4.3p-胡萝卜素标准储备液（500μg/mL）：准确称取3-胡萝卜素标准品50mg（精确到0.1mg）.加人0.25gBHT，用二氯甲烷溶解，转移至100mL棕色容量瓶中定容至刻度.于一20C以下避光储存，使 用期限不超过3个月，标准储备液用前需进行标定，具体操作见附录A.
注：β-胡萝卜素标准品主要为全反式（all-E）3-胡萝卜素，在储存过程中受到温度、氧化等因素的影响，会出现部分全反式β-胡萝卜素异构化为顺式β-胡萝卜素的现象如9-顺式（9Z）-3-胡萝卜素、13-顺式（13.Z）-β-胡萝卜累、15-顺式（15Z）-3-胡萝卜累等.如果采用色谱条件一进行9-胡萝卜素的测定，应按照附录B确认p-胡萝卜索异 构体保留时间，并计算全反式p-胡萝卜素标准溶液色谱纯度.
3.4.4p-胡萝卜素标准中间液（100pg/mL）：从3-胡萝卜素标准储备液中准确移取10.0mL溶液于50mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷定容至刻度.
3.4.5a-胡萝下素、B-胡萝卜素混合标准工作液（色谱条件一用）：准确移取a-胡萝下素标准中间液0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、10.00mL溶液至6个100mL棕色容量瓶，分别加人 3.00mlg-胡萝下素中间液，用二氯甲烷定容至刻度，得到a-胡萝下素浓度分别为0.5yg/mL、1.0 μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL、10 00μg/mL，β-胡萝卜素浓度均为 3.0 μg/mL 的系列混合标准工作液.
3.4.63-胡萝卜素标准工作液（色谱条件二用）：从p-胡萝下素标准中间液中分别准确移取0.50mL、 1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、10.00mL溶液至6个100mL棕色容量瓶.用二氯甲烷定容至/0工作液.
4仪器和设备
4.1匀浆机.4.2高速粉碎机.4.3恒温振荡水浴箱：控湿精度土1C.4.4旋转蒸发器. 4.5氮吹仪.4.6紫外-可见光分光光度计.4.7高效液相色谱仪（HPLC仪）：带紫外检测器.
5分析步骤
注：整个实验操作过程应注意避光.
5.1试样制备
样用匀质器混匀；固体粉末状试样和液体试样用前振摇或搅排混匀.4C冰箱可保存1周. 谷物、豆类、坚果等试样需粉碎、研磨、过筛（筛板孔径0.3mm~0.5mm）；蔬菜、水果、蛋、藻类等试
5.2试样处理
5.2.1普通食品试样
5.2.1.1预处理
蔬菜、水果、菌藻类、谷物、豆类、蛋类等普通食品试样准确称取混合均匀的试样1g～5g（精确至0.001g），油类准确称取0.2g~2g（精确至0.001g），转至250mL锥形瓶中，加入1g抗坏血酸、75mL无水乙醇于60℃±1C水浴振荡30min.
如果试样中蛋白质、淀粉含量较高（>10%），先加人1g抗坏血酸、15mL45℃～50C温水、0.5g木瓜蛋白酶和0.5gα-淀粉酶，盖上瓶塞混匀后，置55℃士1C恒温水浴箱内振荡或超声处理30min后，再加入75mL无水乙醇，于60C土1C水浴振荡30min.
5.2.1.2皂化
加人25mL氢氧化钾溶液，盖上瓶塞，置于已预热至53C士2C恒温振荡水溶箱中，皂化30min取出静置，冷却到室温.
5.2.2添加β-胡萝卜素的食品试样
5.2.2.1预处理
固体试样：准确称取1g~5g（精确至0.001g），置于250mL锥形瓶中，加人1g抗坏血酸，加50mL45℃~50C温水混匀.加人0.5g木瓜蛋白酶和0.5gα-淀粉酶（无淀粉试样可以不加α-淀粉 酶），盖上瓶塞，置55C士1C恒温水溶箱内振荡或超声处理30min.
液体试样：准确称取5g~10g（精确至0.001g），置于250mL锥形瓶中，加人1g抗坏血酸.
5.2.2.2皂化
取预处理后试样，加人75mL无水乙醇，摇匀，再加人25mL氢氧化钾溶液，盖上瓶塞.置于已预热至53C士2C恒温振荡水浴箱中，皂化30min.取出静置，冷却到室温.
注：如皂化不完全可适当延长皂化时间至1h.
5.3试样萃取
将皂化液转人500mL分液漏斗中，加人100mL石油醚，轻轻摇动，排气，盖好瓶塞，室温下振荡10min后静置分层，将水相转人另一分液漏斗中按上述方法进行第二次提取，合并有机相，用水洗至近中性.弃水相，有机相通过无水硫酸钠过滤脱水.滤液收人500mL蒸发瓶中，于旋转蒸发器上40C土2C减压浓缩，近干.用氮气吹干，用移液管准确加人5.0mL二氯甲烷，盖上瓶塞，充分溶解提 取物.经0.45μm膜过滤后，弃出初始约1mL滤液后收集至进样瓶中，备用.
注：必要时可根据待测样液中胡萝卜素含量水平进行浓缩或稀释，使待测样液中α-胡萝卜素和/或B-胡萝卜累浓度
在 0 5 μg/mL~10 μg/mL 范围内.
