NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 1858.3-2010
番茄主要病害抗病性鉴定技术规程 第3部分：番茄抗枯萎病鉴定技术规程
Rulesforevaluation oftomatoforresistance to diseasesPart 3:Rulefor evaluation of tomato for resistance to fusarium wilt
中华人民共和国农业部发布
前言
NY/T1858-2010《番茄主要病害抗病性鉴定技术规程》为系列标准，共8部分：
第1部分：番茄抗晚疫病鉴定技术规程；第3部分：番茄抗枯萎病鉴定技术规程； 第2部分：番茄抗叶霉病鉴定技术规程；第4部分：番茄抗青枯病鉴定技术规程；一第5部分：番茄抗疮癫病鉴定技术规程；-第6部分：番茄抗番茄花叶病毒病鉴定技术规程；第7部分：番茄抗黄瓜花叶病毒病鉴定技术规程； 第8部分：番茄抗南方根结线虫病鉴定技术规程.本部分为NY/T1858-2010的第3部分.本部分的附录A为资料性附录.本部分由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口， 本部分起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所.本部分主要起草人：谢丙炎、冯兰香、杨宇红、杨翠荣、粪惠芝.
第3部分：番茄抗枯萎病鉴定技术规程 番茄主要病害抗病性鉴定技术规程
1范围
本部分规定了番茄抗枯萎病鉴定的术语和定义、接种体制备、鉴定条件和试验设计、接种、病情调查、抗病性评价以及鉴定记载表格.
本部分适用于裁培番茄（SolarmumlycopersicumL）自交系、杂交种、群体、开放授粉品种以及野生番茄和番茄近缘种对番茄枯萎病抗性的室内苗期人工接种鉴定和评价.
2术语和定义
下列术语和定义适用于本部分.
2. 1
番茄枯萎病Tomatofusariumwilt
的土传病害，连作地发病尤为严重.多在开花结果期显现症状，病菌从根部侵入，在维管束里繁殖并使 由尖孢镰刀菌番茄专化型[Fusarium ozysporum f.sp.ycopersici（Sacc.）Snyder&.Hansen]引起之变褐，与之相连的一侧叶片变黄、枯萎，逐渐向上蔓延，植株呈半边枯萎状.湿度高时，茎部发病处长出粉红色霉.
2.2
病原分离物pathogenicisolate
采用人工方法从植物发病部位分离获得的病原物的纯培养物.
2.3
生理小种physiologicalrace
病原物种内或专化型内在形态上无差异，但在寄主植物的品种上具有显著致病性差异的类群.
用于鉴定和区分特定病原物的生理小种/致病型/株系的一套带有不同抗性基因的寄主品种、品系或材料.
2.5
致病性pathogenicity
病原物所具有的破坏寄主植物和引起病变的能力.
2.6
可以使病原物生长的、自然的或人工配制的基质.
接种体inoculum
用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分.
2.8
接种悬浮液suspension suspension
NY/T 1858.3-2010
用于接种的含有定量接种体的液体.
2.9
在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物体的适当部位并使之发病的过程.
2. 11
病情指数disease index（DI）
2. 13
通过适宜技术方法鉴定植物对特定病害的抵抗水平.
2. 14
抗性评价evaluation ofresistancelevels 根据采用的技术标准判别植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述.
3接种体制备
3.1病原物分离
以常规组织分离法，从发病茎部的褐色维管束组织中分离枯萎病病原物.分离物经形态学鉴定和致病性测定确认为尖孢镰刀菌番茄专化型后，再进行分离物的纯化，保存备用.
3.2生理小种鉴定
对用于抗病性鉴定接种的病原分离物进行生理小种的鉴定，鉴定方法参照附录A的A.2.
3.3接种体繁殖和保存
3.3.1接种体繁殖
将保存在PDA培养基斜面试管内的番茄枯萎病菌菌株用灭菌蒸馆水制成孢子悬浮液，然后均匀涂抹在PDA平板培养基上，置24℃~26℃下培养约7d，每天光照12h，待培养基表面长满孢子层时，用灭培养基上的枯萎病菌接种于盛有150mLPL培养液的锥形瓶中，25C下120r/min振荡培养7d.培养 菌蒸馏水洗下分生孢子，并制成浓度约为1×10°个孢子/mL的接种悬浮液；也可将保存在PDA斜面液经两层纱布过滤，并经4000r/min离心10min，例掉上清液，加灭菌蒸馏水稀释成浓度约为1×10个孢子/mL的接种悬浮液.
PDA培养基的配置；马铃暮200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mlL，121℃高压灭菌20min.
PL培养液的配制：马铃薯200g，乳糖20g，蒸馏水1000mL，121C高压灭菌20min.
3.3.2接种体保存
将枯萎病菌接种在PDA培养基斜面试管内，在24C~26C下培养，每天光照12h，7d后置4C冰箱内保存，保存期1~2个月；或采用石蜡油低温保存法，即在斜面菌种上加一层灭菌的优质液体石蜡（高出斜面顶部1cm），置一4℃~4℃下保存.
4鉴定条件和试验设计
4.1签定室
2
苗期抗病性鉴定的鉴定室能够人工调节室内温度、湿度和光照，使之具备良好的发病环境.
4.2鉴定设计
鉴定材料随机排列或顺序排列，每份鉴定材料重复3次，每一重复10株苗.
4.3鉴定对照材料
理小种1用“Tropic"番茄，接种生理小种2用“Walter”番茄，接种生理小种3用"Lycopersiconpennelli 设“丽春”或“Moneymaker”番茄为感病对照品种；抗病对照品种依接种的生理小种而定，如接种生LA716"番茄.
4.4鉴定材料育苗
育苗筐内，育苗基质为草炭、蛭石和菜田土（2：1：1），经高温蒸汽灭菌（134℃，30min）后方可使用. 鉴定材料种子经10%次氯酸钠溶液浸泡10min，清水冲洗后置于恒温培养箱中28℃催芽，播种于在日光温室里育苗，室内温度18℃~25℃.幼苗应生长健壮、一致.
5接种
5.1接种时期
幼苗在1~2片真叶期进行接种.
5.2接种方法
采用浸根法接种，拔起幼苗并用清水将根系冲洗干净，然后将整个根系在接种悬浮液中浸泡10min，再移栽到苗体.
5.3接种后的管理
14h，光照强度为35klx，正常栽培管理. 接种后的室内温度为25℃~30℃，土壤温度为25℃~28℃，土壤湿度85%~90%，每天光照12h~
6病情调查
6.1病情级别划分
幼苗病情级别及其相对应的症状描述见表1.
表1番茄枯萎病病情级别的划分
病情级别 0 无症状 症状措述1 1~2片子叶明显变黄、脱落2 1~2片真叶变成黄色或全株叶片变成黄绿色，叶片下垂呈轻微萎3 4 全株明显获薄或叶片严重变黄，植株生长受阻、稍矮化 全株叶片严重菱端甚至枯死
6.2调查时间
接种后约10d进行.
6.3病情记载
调查记载每一鉴定植株的病情级别，并计算病情指数.
病情指数按公式（1)计算：
DI = ∑（sXn） NXS ×100 (1)
式中：
DI病情指数；
