中华人民共和国水产行业标准
细菌性肾病诊断方法
Diagnostic methods for bacterial kidney disease
中华人民共和国农业农村部 发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出.
细菌性肾病诊断方法
1范围
本文件描述了细菌性肾病（bacterial kidney disease）诊断的试剂和材料、仪器设备、临床症状、样品，以及组织印片检查、套式PCR检测和综合判定的方法.
本文件适用于肾杆菌（Renibacterium salmoninarum）引起的科鱼类细菌性肾病的流行病学调查、诊断、检疫和监测.
2规范性引用文件
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，文件.
SC/T7011.1水生动物疾病术语与命名规则第1部分：水生动物疾病术语SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范
3术语和定义
SC/T7011.1界定的以及下列术语和定义适用于本文件.
3. 1
细菌性肾病bacterial kidney disease
由肾杆菌感染引起的科鱼类疾病.
4缩略谱
下列缩略语适用于本文件.BKD;细菌性肾病(bacterial kidney disease)CTAB：十六烷基三甲基浪化铵（hexadecyl trimethy ammonium bromide) bp:碱基对(base pair)DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）dNTPs：脱氧核糖核甘三磷酸混合物（deoxy-ribonucleoside triphosphate mixture）EDTA;乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid)PCR：聚合酶链式反应（polymerase chain reaction） Taq：水生栖热菌（Thermas aquaticus）TE：Tris 盐酸和 EDTA 缓冲溶液（EDTA Tris HCI)Tris:三羟甲基氨基甲烷(tris hydroxymethyl aminomethane)
5试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水.5.1dNTPs（A、T、G、C四种碱基各 10 mmol/L):20C保存.5.2DNA分子量标准溶液：一20C保存.5.3核酸染料：4℃保存.5.4琼脂糖：电泳级.5.5TaqDNA聚合酶（5 U/L):-20C保存.
SC/T 7245-2025
5.6香柏油：常温保存.5.7无水乙醇：常温保存.5.810×PCR缓冲液（含Mg，25 mmol/L）:-20℃C保存.5.9苹兰氏染色液：按A.1配制.5.10CTAB溶液：按A.2配制. 5.11抽提液I：按A.3配制.5.12抽提液Ⅱ：按A.4配制.5.13TE缓冲液：按A.5配置.5.145×电泳缓冲液：按A.6配制.5.156×上样缓冲液：按A.7配制.5.16阳性对照：已知感染肾杆菌的科鱼类组织样品，一20℃~一80C保存.5.17阴性对照：已知未感染肾杆菌的科鱼类组织样品，-20C~一80℃保存. 5.18空白对照：蒸馏水.5.19第一轮PCR引物，-20C保存，引物序列如下：引物 F1;5'-AGCTTCGCAAGGTGAAGGG-3';引物 R1:5'-GCAACAGGTTTATTTGCCGGG-3'.5.20第二轮PCR引物，-20C保存，引物序列如下：引物 F2:5'-ATTCTTCCACTTCAACAGTACAAGG-3'; 引物 R2:5'-CATTATCGTTACACCCGAAACC-3′.
6仪器设备
6.1普通冰箱.6.2超低温冰箱：一80℃及以下.6.3显微镜. 6.4电子天平.6.5微量组织研磨仪（器）.6.6水浴锅.6.7高速冷冻离心机：最高转速12000r/min及以上，温度4℃.6.8微量移液器.6.9普通PCR仪.6.10水平电泳仪.6.11凝胶成像仪.
7临床症状
患病鱼体色发黑，眼球突出，解剖后，肾脏出现直径2mm~4mm白色肉芽肿，见附录B中的图B.1：严重时肝脏、脾脏中也出现白色肉芽肿，见图B2和图B.3.
8样品
8.1采样对象鲑科鱼类.8.2采样部位8.2.1体长≥6cm的鱼，取肾脏、肝脏和脾脏. 2
