中华人民共和国国家标准
GB/T 34797-2017
核酸引物探针质量技术要求
Quality technical requirements of primers and probes
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387）提出并归口
本标准起草单位：中国测试技术研究院生物研究所、中国测试技术研究院、苏州金唯智生物科技有限公司、深圳华大基因研究院、深圳市计量质量检测研究院.
本标准起草人：周李华、李怀平、马丽侠、刘明东、郝军政、蒋慧、王智、叶德萍、史谢飞、杨国武、谭和平.
核酸引物探针质量技术要求
1范围
本标准规定了DNA引物探针的质量评价指标、技术要求、试验方法、包装运输和储存要求.本标准适用于DNA引物探针等寡核苷酸产品的质量评价及其检测.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T191包装储运图示标志 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.1转基因产品检测通用要求和定义GB/T30988多酚类植物基因组DNA提取纯化及测试方法
3术语和定义
GB/T19495.1界定的以及下列术语和定文适用于本文件.
3.1
寡核苷酸oligonucleotide
成，它可作为DNA合成的引物、基因探针等. 二至三十个核苷酸残基以磷酸二酯键连接面成的线性多核苷酸片段.寡核苷酸可由仪器自动合
注：在使用这一术语时.对核昔酸残基的数目并无严格规定，在不少文献中，把含有三十甚至更多个核苷酸残基的多核苷酸分子也称作赛核苷酸.
3.2
引物primer
另一端的另一条DNA模板链互补.
3.3
探针probe
一段带有检测标记，且序已知的，与目的基因互补的核酸序列.
定制序列custom sequence
客户提供的DNA序列及合成要求等信息.
3.5
定制引物custom primer
客户提供的DNA引物序列及合成要求等信息.
GB/T 34797-2017
9定制探针 custom probe
客户提供的DNA探针序列、修饰集团及合成要求等信息.
3.71OD单位 1OD
在1mL体积1cm光程标准比色Ⅲ中，260nm波长下吸光度为1的寡核苷酸溶液.
序列比对 alignment
为确定两个或多个序列之间的相似性和同源性，面将它们按照一定的规律排列并分析的过程.
4缩略语
下列缩略语适用于本文件.DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid）DSL;脱盐(desalination)HAP：新型寡核苷酸纯化（high affinity purification） HPLC：高效液相色谱（high performance liquid chromatography)MS：质语（mas spectrometer)OD：光密度（optical density）OPC：寡核苷酸纯化柱（oligonucleotide purification cartridge) PAGE：变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis）
5质量评价要求
5.1技术要求
DNA引物探针产品质量控制指标及技术要求应符合表1的规定.
表1DNA引物探针产品质量技术要求
产品种类 指标 要求总量OD ≤10%碱基准确性 与定制引物序列一致脱垫（如DSL等） >75%纯度” 过柱（如（OPC HAP等） >85%PAGE级 90%引物 脱垫（如 DSL等） HPLC 级 >95% ≥70%，或序列中有连续5个G以上时，其纯度值与表1规定纯度值差值的绝对值应≤5%.探针合成宜采用HPLC纯化方式.
5.2外观及性状
产品应为半透明或不透明的片状粉状物质、无异味，易溶于水和TE缓冲液.
5.3引物探针的总量
引物探针的总量一般以OD来表示，合成产品OD测量值与定制序列OD值作比较，要求总量相对误差≤10%.
5.4引物探针的相对分子质量
测得的引物探针相对分子质量（MW）与定制序列MW值作比较，要求相对分子质量相对误差≤0.05%
5.5碱基准确性（DNA序列的一致性）
将合成的引物探针序列与定制序列进行比对，匹配度应达到100%.
5.6碱基缺失率
合成产品碱基缺失率应符合表1要求.
5.7引物探针的纯度
5.8探针修饰基团的准确性
探针修饰基团定制序列应完全一致.
5.9试验效果评估
聚体带等. 将合成以后的引物探针进行PCR扩增以对其试验效果进行评估，包括特异性、效率、产物、引物二
