NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 4720-2025
莲藕腐败病抗性鉴定技术规程
Technical code ofpractice for evaluation of lotus resistance tolotusrhizomerot disease
中华人民共和国农业农村部 发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口.
本文件起草单位：江苏省农业科学院、全国农业技术推广服务中心、南京市浦口区现代农业发展服务中心、南京市高淳区植保植检站、武汉市农业科学院、广昌县白莲产业发展中心、广西壮族自治区农业科学院、金华市农业科学研究院.
本文件主要起草人：魏利辉、夏华兴、吴承东、周阳、邓晟、朱红莲、佳琪、杨良波、江文、张尚法、檀时山、周冬梅、王楠、王晓宇、赵敏、张金风、王凌云、宋瑞琪、腺辉、王贝、刘书勤.
莲藕腐败病抗性鉴定技术规程
1范围
本文件确立了莲藕腐败病抗性鉴定程序，规定了接种方法和抗性鉴定的步骤与基本要求，描述了对应的证实方法.
本文件适用于莲藕（NelambonaciferaGaertn）品种及种质资源对腐败病的抗性鉴定.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
NY/T837莲藕裁培技术规程
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3.1
莲藕腐败病lotusrhizome rot disease
由尖孢刀菌（Fusariumozysporum Schl.f.sp.nelumbicola）及其近缘种（F，mame）侵染莲藕而引起的一种土传、种传真菌病害.病原及发病症状见附录A.
3.2
用于接种以引起病害发生的病原物或病原物的一部分.
莲子实生苗seedlingsfrom lotus seeds
成熟莲种子在适宜条件下发芽生长，形成具有独立根系、茎和叶的正常植株个体.
3. 4
种藕营养体繁殖苗seedlingsfromlotusrhizome
莲藕节上的芽在适宜条件下生长，形成具有独立根系、茎和叶的植株个体.
4鉴定程序
莲藕腐败病抗性鉴定程序包括接种体的准备、病原菌接种和抗性鉴定三个阶段，流程如图1所示.
5试剂与材料
除非另有说明，在本文件中仅使用确认的分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水.
琼脂(potato dextrose agar-PDA）培养基. 葡萄糖、马铃薯和琼脂，用于制备马铃薯葡萄糖（potato dextrose broth.PDB)培养基和马铃薯葡萄糖
蛭石和营养土用于植物材料的种植.
6仪器及用具
高压灭菌锅、摇床、培养箱、显微镜、培养瓶、血球计数板和纱布等.
图1鉴定流程
7接种体的准备
接种的病原应选择当地致病性较强或致病频率较高的优势病原菌，其分离、鉴定和保存按照附录B.保存的菌株首先转接至无菌的PDA培养基上活化，培养箱内25C生长7d；然后将适量活化的培养物转接至装有无菌PDB培养基的培养瓶中，置于摇床内，在25℃、120r/min~180r/min条件下振荡培养5 d~7 d.
对滤出液中的分生孢子进行浓度计数，最后用无菌蒸馏水调整分生孢子浓度至1×10个分生孢子/mL， 培养结束后，用无菌纱布过滤PDB培养物以去除菌丝，之后在显微镜下检查滤出液，并用血球计数板备用.
8病原菌接种
8.1莲子实生苗接种
8.1.1实生苗准备
在成熟种子的胚芽侧（较圆滑的一侧），将种皮剪开直径5mm~7mm的圆形口，在加热至60℃的蒸馏水中浸种15min，其间不定期搅拌，以清除种子表皮潜在病原物，同时促进后期种皮开裂和芽的萌发.浸种后，将种子在无菌蒸馏水中浸泡4d~5d，直到大多数种子幼芽长度达到0.5cm~1.0cm，其间需更换无菌蒸馏水，使水质始终保持清澈干净.
8.1.2实生苗的接种方法
将发芽的莲子实生苗在上述病原菌的孢子悬浮液（1×10*个孢子/mL）中浸泡60min，每个品种或资源至少接种30粒发芽的种子，每10粒种子作为一个重复.
8.1.3实生苗的接种后管理
后，加人无菌蒸馏水，水层刚刚覆盖基质表面即可，种植环境需满足日平均环境温度大于等于20℃，具备自然光照，或光照16h、黑暗8h的人工补光条件.此外，需要定期补充水分，同时做好虫害的防控.
