中华人民共和国国家标准
GB 1903.76-2025
食品安全国家标准
食品营养强化剂 血红素铁
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
食品安全国家标准
食品营养强化剂血红素铁
1范围
本标准适用于以检验检疫合格的动物血液或经离心分离得到的血球液为原料经酶解、分离、干燥制得的食品营养强化剂血红素铁.
2化学名称、分子式、结构式和相对分子质量
2.1化学名称血红素铁
2.2分子式CHFeN O
2.3结构式
2.4相对分子质量
616.499（按2022年国际相对原子质量）
3技术要求
3.1感官要求
感官要求应符合表1的规定.
表1感官要求
项目 要求 检验方法色泽 红褐色至黑褐色状态 粉末或颗粒 取适量试样置于洁净、干燥的透明玻璃器Ⅲ中，在气味 无味或轻微的血红索铁特征性气味 自然光下观察其色泽、状态，噢其气味，现察其杂质杂质 无肉眼可见杂质
3.2理化指标
理化指标应符合表2的规定.
表2理化指标
铁（以 Fe计）/% 项目 1 0~2.6 指标 GB 5009 90 检验方法血红索铁L以CHFeNO计）/% 9 0~27 0 附录A中A.3干燥减量，u/% 6 0 GB 5009 3（直接干燥法）灼烧残渣，w/% 12.0 GB 5009 4铅(Pb) / (mg/lkg) 2 0 GB 5009 75 或 GB 5009 12总确(以 As 计)/(mg/kg) 2 0 GB 5009 76 或 GB 5009.11
3.3微生物限量
微生物限量应符合表3的规定.
表3微生物限量
采样方案”及限量项目 c m M 检验方法沙门氏菌/25g 5 0 0 GB 4789 4金黄色葡萄球菌/（CFU/g) 5 1 100 1 000 GB 4789 10 第二钛样品的采样及处理按GB4789.1执行.
检验方法
附录A
A.1一般规定
本标准的检验方法中所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682规定的三级水，试验中所用溶液在未标明用何种溶剂配制时，均指水溶液.
A.2鉴别试验
A.2.1试剂和材料
A.2.1.1氢氧化钠.A.2.1.2吡啶.A.2.1.3次亚硫酸钠.A.2.1.4硝酸：色谱纯.A.2.1.5氨水. A.2.1.61mol/L氢氧化钠溶液：称取40.0g氢氧化钠，用无二氧化碳的水溶解并定容至1L.A.2.1.7毗啶氢氧化钠溶液：吸取100mL毗啶，加人30mL1mol/L氢氧化钠溶液，用水稀释至300 mL.
A.2.2.1分析天平：感量0.0001g.A.2.2.2紫外分光光度计.
A.2.3鉴别方法
A.2.3.1呈色试验
5mL加人15mg的次亚硫酸钠，溶液应呈现红色.A.2.3.1.2称取0.01g（精确至0.0001g）血红素铁试样置于100mL烧杯中，加人5mL硝酸，加热，溶液应呈现黄色，冷却后用氨水碱化，溶液应呈现橙黄色.
A.2.3.2紫外光谱法
称取0.01g（精确至0.0001g）血红素铁试样，溶解于50mL的晚啶氢氧化钠溶液中，在紫外光扫描谱图中，在399nm波长处具有最大吸收.
A.3血红素铁（CHFeNO）含量的测定
A.3.1方法提要
样品中的血红素铁用吡啶氢氧化钠溶解，采用液相色谱分离，紫外或二极管阵列检测器检测，保留时间定性，峰面积外标法定量.
A.3.2试剂和材料
除另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
GB 1903.76-2025
A.3.2.1甲醇：色谱纯.A.3.2.3氢氧化钠.A.3.2.4吡啶.A.3.2.51mol/L氢氧化钠溶液：称取40.0g氢氧化钠，用无二氧化碳的水溶解并定容至1L. A.3.2.6毗啶氢氧化钠溶液：吸取100mL毗啶，加人30mL1mol/L氢氧化钠溶液，用水稀释至300 mL A.3.2.7羟高铁血红素（CHFeNO，CAS号：15489-90-4）标准品：含量≥98.0%.A.3.2.8羟高铁血红素标准储备液：准确称取100℃C干燥3h的羟高铁血红素0.1028g，用吡啶氢氧化 钠溶液（A.3.2.6）溶解并定容至100mL，此溶液相当于血红素铁1mg/mL.在棕色试剂瓶中0℃~4C避光保存，有效期7d.A.3.2.9滤膜：0.45μm，水相.
A.3.2.2甲酸：色谱纯.
A.3.3仪器和设备
A.3.3.1高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器.A.3.3.2分析天平：感量0.0001g.A.3.3.3超声波发生器：功率大于180W.A.3.3.4离心机：大于4000r/min.A.3.3.5恒湿干燥箱.
A.3.4液相色谱参考条件
A.3.4.1色谱柱：C柱柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm或等效色谱柱.A.3.4.2流动相：甲醇：0.1%甲酸水溶液=70：30（体积比）.A.3.4.4柱湿：30C. A.3.4.3流速：1.0 mL/min.A.3.4.5进样量：5.0LA.3.4.6检测波长：399 nm.
A.3.5分析步骤
准确称取试样0.1g（精确至0.0001g），用毗啶氢氧化钠溶液（A.3.2.6）溶解，避光条件下超声波助溶10min，冷却至室温，转移至50mL容量瓶中，用吡啶氢氧化钠溶液定容至刻度，混匀，量取该溶液1mL置10mL容量瓶中，用吡啶氢氧化钠溶液稀释至刻度，4000r/min离心10min，取上清液，滤膜过滤，液相色诺测定，并做空白试验，除不加试样外，其他操作与测定试样相同.
A.3.6定性分析
依据保留时间一致性进行定性识别的方法，根据羟高铁血红素标准品的保留时间，偏差在土2.5%以内，确定样品中血红素铁的色谱峰（见附录B）.
A.3.7定量分析
分别取羟高铁血红素标准储备液（A.3.2.8）0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、5.00mL于50mL容量瓶中，用吡啶氢氧化钠溶液（A.3.2.6）定容配制成相当于血红素铁溶液质量浓度分别为5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL60μg/mL、100μg/mL的标准溶液，液相色谱测定，以血红素铁浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线.
