中华人民共和国国家标准
GB 23200.74-2016
食品安全国家标准 食品中井冈霉素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法
National food safety standards-
Determination of validamycin residue in foods
Liquid chromatography - mass spectrometry
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 中华人民共和国农业部 国家食品药品监督管理总局
发布
前言
本标准代替SN/T2387-2009《进出口食品中井冈霉素残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》. 本标准与SN/T2387-2009相比，主要变化如下：一标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式：一标准名称中“进出口食品”改为“食品”：本标准所代替标准的历次版本发布情况为： 一标准范围中增加“其它食品可参照执行”.-SN/T .
食品安全国家标准
食品中井冈霉素残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
1范围
本标准规定了食品中井冈霉素残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法.本标准适用于大米、卷心菜、葱、胡萝卜、番茄、黄瓜、菠菜、木耳、梨、柠檬、杏仁、茶叶、猪肉、 猪肝、罗非鱼、虾中井冈霉素残留的检测和确证，其它食品可参照执行.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件. 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中的井冈霉素残留用甲醇水溶液提取，经HLB固相萃取柱或乙酸乙酯液液萃取净化，用液相色谱一质谱/质谱仪检测和确证，外标法定量.
4试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为液相色谱纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水.
4.1试剂
4.1.1乙酸铵（CHCOONH，CAS号：631-61-8）.4.1.2 甲醇（CHsOH，CAS号：67-56-1）.4.1.3乙晴（CHCN，CAS号：75-05-8）. 4.1.4乙酸乙酯（CHCOOCHCH，CAS号：141-78-6）.4.1.5冰乙酸（CH;COOH，CAS号：64-19-7）.
4.2溶液配制
4.2.25mol/L乙酸铵缓冲溶液：称取0.385g乙酸铵，用水溶解并定容至1000ml，以冰乙酸调节 4.2.1甲醇溶液（91）：量取90mL甲醇加入10mL水中，混匀.pH 到 4. 5±0. 1.
4.3标准品
4 3.1井冈霉素标准品（Validamycin A，分子式：C2HsyNOs，CAS：37248-47-8）：纯度≥91.0%.
4.4标准溶液配制
4.4.1井冈霉素标准储备溶液：称取2g（精确到0.1g）井冈霉素的标准品，用水溶解并定容至25mlL棕色容量瓶中，配制成浓度为80mg/L的标准储备溶液.4.4.2井冈霉素基质标准工作溶液：根据需要，用空白样品按照样品处理步骤得到的提取液，配制不同浓度的基质标准溶液，现用现配.
4.5.1HLB柱：6mlL/200mg或相当者：使用前依次用6mL甲醇和6mL水活化.4.5.2滤膜：0.22μm，双相.
5仅器和设备
5.2分析天平：感量0.01g和0.0001g 5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配大气压化学电离源（APCI）.5.3旋涡混合器.5.4均质器.5.5离心机：转速大于3000r/min5.6氮吹浓缩仪. 5.7离心管：50mL聚四氟乙烯离心管和50mL具塞玻璃离心管.5.8刻度试管：30ml，最小刻度为0.1ml.5.9pH计：感量0.1.
6样品制备与保存
6.1制样要求
制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.
6.2茶叶及粮谷类
取代表性样品约500g，经磨碎机全部磨碎并通过2.0m圆孔筛，混匀，装入洁净容器内密封，标明标 记，于0C~4C冷藏存放.
6.3蔬菜及水果类
取代表性样品约500g，切碎，经多功能食品搅拌机充分搞碎均匀，装入洁净容器内密封，标明标记，于-18C以下冷冻存放.
取代表性样品约500g，用磨碎机全部磨碎并通过20mm圆孔筛，混匀，装入洁净容器内密封，标明标记，
于0C～4C冷藏存放.
6.5动物肌肉、肝脏、鱼肉、虾
取代表性样品部分约500g，切碎，经多功能食品搅拌机充分捣碎均匀，装入洁净容器内密封，标明标 记，于-18C以下冷冻存放.注：以上样品取样部位按GB2763附录A执行.
7分析步骤
7.1提取
7.1.1大米、木耳、杏仁
称取2.5g试样（精确至0.01g），置于50mlL聚四氟乙烯离心管中，加入20mL甲醇溶液，用均质器高速匀浆提取2min，3000r/min离心5min，收集上清液于一刻度试管中.离心后的残渣用5mL甲醇溶液重复上述提取步骤1次，合并上清液，在45C水浴下吹氮浓缩至2.5m以下，待净化.
7.1.2卷心菜、葱、胡萝卜、番茄、黄瓜、菠菜、梨、柠檬、猪肉、猪肝、鱼肉、虾
称取2.5g试样（精确至0.01g），置于50mL聚四氟乙烯离心管中，加入20mL甲醇，用均质器高速匀浆提取2min，3000r/min离心5min，收集上清液于一刻度试管中.离心后的残渣用5mL甲醇溶液重复上述提取步骤1次，合并上清液，在45C水浴下吹氮浓缩至2.5mL以下，待净化.
称取1g试样（精确到0.01g），加1.5mL水，混匀，其余按7.1.1操作.
7.2净化7.2.1固相萃取（SPE）净化
将7.1中所得提取溶液转入经过预处理的HLB固相萃取柱中，以约1滴/s流速使样品溶液通过固相萃取柱，用2mL水淋洗柱子，收集全部流出液和淋洗液到一刻度试管，加水定容至5.00mlL，混匀，过0.22um 滤膜，供测定.
7.2.2液-液分配净化
将7.1中所得提取溶液用水定容至5.00ml，混匀，转入50mL具塞玻璃离心管中，加入5mlL乙酸乙酯，旋涡振荡3min，3000r/min离心5min，弃去上层乙酸乙酯相，再用5mL乙酸乙酯重复操作一次.过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定.
7.3测定
7.3.1液相色谱参考条件
色谱柱：HILIC（250mm×4.6mm，粒径5μm），或相当者.流动相：乙睛5mmol/L乙酸铵缓冲溶液，梯度洗脱（见表1）. 流速：1000μl/min.a)柱温：35℃.b）进样量：10uL.
表1液相色谱的梯度洗脱条件
时间/nin 0.0 5 mol/L乙酸按缓冲溶液/% 20 乙猜/% 804.0 45 5510.0 45 5510. 1 20 8016.0 20 80
7.3.2质谱参考条件
质谱条件参见附录A.
7.3.3色谱测定与确证
在仪器最佳工作条件下，根据样液中被测化合物的含量情况，选定峰高相近的基质标准工作溶液，对基质标准工作溶液和样液等体积参差进样测定.以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用 标准工作曲线对样品进行定量，基质标准工作溶液和样液中待测化合物的响应值均应在仪器测定的线性范围内.在上述仪器条件下，井冈霉素的参考保留时间约为8.10min：井冈霉素标准品色谱图参见附录B中图B.1.
之内：且样液中定性离子对的相对丰度与浓度接近的基质标准工作溶液进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物.
表2使用液相色谱-质谱/质谱定性时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度 >50% >20%至50% >10%至 20% ≤10%允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50%
7.4空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行.
