NY
中华人民共和国农业行业标准
饲料添加剂氨基酸锰及蛋白锰 络（鳌）合强度的测定
Determination of plexation(chelation)strengths ofmanganese-amino acids and manganese-proteinates as feed additives
中华人民共和国农业部发布
前言
本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草.
本标准由农业部畜牧业司提出.
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口.
本标准起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、哈尔滨德邦鼎立生物科技有限公司、济宁和实生物科技有限公司.
饲料添加剂氨基酸锰及蛋白锰络（整）合强度的测定
1范围
本标准规定了饲料添加剂氨基酸锰及蛋白锰络（整）合强度的测定方法，本标准适用于饲料添加剂氨基酸锰及蛋白锰络（螯）合强度的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T13885动物饲料中钙、铜、铁、镁、锰、钾、钠和锌含量的测定原子吸收光谱法 GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3. 1
氮基酸锰及蛋白锰络（整）合强度plexation（chelation）strengths of manganese-amino acidsand manganese-proteinates
度为0.1mol/L、pH=8.0的BES缓冲底液中，用悬汞电极极谱仪分别测定锰浓度为5×10mol/L.的 锰元素与有机配位体之间形成的配位键的强度，以Q（Quotientofformation）值表示，即在离子强硫酸锰的半波电位Eu与锰浓度为3.5×10-mol/L的氨基酸锰或蛋白锰的半波电位E，以2个半波电位的绝对差值△E2，由公式Q-102x进行计算.
注：氨基酸锰或蛋白锰的络（整）合强度一般分为4个等级，即Q在0~10时为弱络（警）合强度、10~100时为中等 络（整）合强度、100~1000时为强络（菱）合强度及1000以上时为极强络（整）合强度.
4原理
Mn（Hg），但氨基酸锰或蛋白锰需先打开配位键释放出锰离子.锰离子与有机配位体形成的配位键的强 硫酸锰、氨基酸锰或蛋白锰中的锰离子均可在极谱仪的悬汞电极上被还原为锰形成锰汞齐度越大，打开配位键所需的电压就越大，即半波电位的绝对值也越大，因此，在特定条件下，通过测定氨基酸锰或蛋白锰的半波电位，利用其与硫酸锰半波电位的差值，即可计算氨基酸锰或蛋白锰的络（整）合强度.
5试剂和溶液
5.1N.N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸（BES).5.2氢氧化纳.5.4BES缓冲液（离子强度为0.1mol/L、pH=8.0）：称取BES24.006g溶于500mL水中，称NaOH
本标准方法所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682规定的一级水.
5.30.1mol/LMnSO溶液：称取MnSOHO1.691g，定容于100mL容量瓶中.
4.504g溶于400mL.水中；将上述NaOH溶液缓缓倒人BES溶液中，调节pH到8.0后，转移至
NY/T 2694-2015
1000mL容量瓶中，定容至刻度.
6仪器和设备
6.1恒温水浴振荡器.6.2分析天平，感量0.0001g.6.3实验用样品粉碎机或研体.6.4悬汞电极极谱仪.
7采样和试样制备
按GB/T14699.1的规定采集试样，并按GB/T20195的规定以四分法缩减分取试样，混匀装人磨口瓶中低温保存备用.
8分析步骤
8.1氨基酸锰及蛋白锰样品中总锰含量测定
称取氨基酸锰或蛋白锰样品0.2g，精确至0.0001g.其他步骤按GB/T13885中的规定操作，用以测定试样中的总锰含量.
8.2锰浓度约为0.7mol/L.的氨基酸锰或蛋白锰过滤液制备及锰含量分析
8.2.1氨基酸锰或蛋白锰过滤液的制备
氨基酸锰或蛋白锰样品称样量m，数值以克（g）表示，按式（1）计算.
m=cXVXM
(1)
式中：
（--制备的氨基酸锰或蛋白锰过滤液锰浓度，单位为摩尔每升（mol/L)（c=0.7)；
V-一过滤液的体积，单位为升（L）；锰的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol）（M=54.94）；入-氨基酸锰或蛋白锰的溶出率按70%计算（1=0.7）. 氨基酸锰或蛋白锰样品的锰含量，单位为百分率（%）；
根据式（1）的计算结果称取氨基酸锰或蛋白锰样品，精确至0.0001g.于100mL锥形瓶中.加人50mL水，密.将以上溶液置于37C恒温水浴搬荡器中振荡8h，5000r/min离心20min，干过滤后备用.
8.2.2氨基酸锰或蛋白锰过滤液中锰浓度分析
准确移取过滤液1mL.其他步骤按GB/T13885中的规定操作，用以测定过滤液中的锰含量，并换算为过滤液中的锰浓度.
8.3极谱待测溶液的制备
8.3.1锰浓度为5×10mol/L硫酸锰极谱待测液的制备
电解槽中应加入的硫酸锰溶液的体积V.数值以微升（gL）表示，按式（2）计算. V=VXX1000
式中：
V.--电解槽中溶液的终体积，单位为毫升（mL)；
-电解槽中硫酸锰极谱待测液的最终锰浓度，单位为摩尔每升（mol/L）（c=5X10-）；
硫酸锰溶液（5.3）的锰浓度，单位为摩尔每升（mol/L）（c=0.1）.
根据式（2）计算的体积V，向电解槽中加入硫酸锰溶液（5.3）.再加BES缓冲液（5.4）稀释至所用体积.本溶液现配现用.
8.3.2锰浓度为3.5×10-mol/L的氨基酸锰或蛋白锰极谱待测溶液的制备
电解槽中应加入的氨基酸锰或蛋白锰过滤液体积V，数值以微升（gL）表示，按式（3）计算.
C
式中：
V.一一电解槽中溶液的终体积，单位为毫升（mL）；-电解槽中氨基酸锰或蛋白锰极谱待测液的最终锰浓度，单位为摩尔每升（mol/I.）（c= 3.5×10-);c-氨基酸锰或蛋白锰过滤液（8.2.1）的实测锰浓度，单位为摩尔每升（mol/L).
根据式（3）计算需要加人的氨基酸锰或蛋白锰样品过滤液体积，向电解槽中加人氨基酸锰或蛋白锰过滤液（8.2.1）.再加BES缓冲液（5.4）稀释至所用体积.本溶液现配现用.
8.4极谱待测液半波电位的测定
根据各自仅器性能调至最佳状态.
悬汞电极极谱仪工作参考条件：在室温（25士1）℃C时，用悬汞电极极谱仪测定硫酸锰及氨基酸锰或蛋白锰极谱待测液的半波电位Eun.
实验技术：根据仅器选择线性扫描或脉冲扫描.
实验参数：充氮时间为300s，
平衡时间为5s.扫描范围为-1.80V~-1.20V.扫描速度为10mV/s，采样间隔为1mV.
9结果计算
氨基酸锰或蛋白锰的络（整）合强度值Q按式（4）计算.
式中：
Q 氨基酸锰或蛋白锰的络（警）合强度值；2 -锰从其氧化态（Mn²）到还原态（Mn）时的电子转移数目：E1 硫酸锰半波电位与氨基酸锰或蛋白锰半波电位的差值，单位为伏特（V)；0.05916--温度为25C时的常数.
10结果表示
测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字.
11重复性
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值应不大于这2个测定值的算术平均值的20%.
