中华人民共和国农业行业标准
植物油中香草酸等6种多酚的测定 液相色谱一串联质谱法
Determination of six phenolic pounds in vegetable oils-Liquidchromatography tandemmassspectrometry
中华人民共和国农业部发布
前言
本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料产品质量安全风险评估实验室（武 本标准由农业部种植业管理司提出并归口汉）农业部油料及制品质量监督检验测试中心.本标准主要起草人：李培武、马飞、张文、张良晓、姜俊、喻理、汪雪芳.
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
1范围
本标准适用于植物油中香草酸、咖啡酸、表儿茶素、芥子酸、阿魏酸、肉桂酸的测定. 本标准方法香草酸、咖啡酸、表儿茶素、芥
本标准规定了植物油中多酚含量的测定方法.
内桂酸的检出限均为0.4μg/kg.手酸、阿规酸
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是 件，仅 日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引 用文件
3原理
多酸用正已烷 中联质谱负离子模式测定，外标法定 A 北农缩后液
4试剂
4.11表儿茶素标准品（CgHO，CAS号：970-74-1)：含量≥98.0%.
4.12芥子酸标准品（CHgO，CAS号：530-59-6）：含量≥99.0%.
4.14肉桂酸标准品（C HO，CAS号：140-10-3）：含量≥99.0%.
4.15多酚化合物标准溶液配制：
4.15.1标准储备溶液：分别精密称取10.0mg香草酸（4.9）、咖啡酸（4.10）、表儿茶素（4.11）、芥子酸（4.12）、阿魏酸（4.13）、肉桂酸（4.14）标准品于10mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.1）溶解并稀释至刻度，
NY/T 3113-2017
分别配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液，一20℃以下避光保存.
4.15.2混合标准储备液：分别精密量取1.0mg/mL的香草酸、咖啡酸、表儿茶素、芥子酸、阿魏酸、肉桂酸标准储备溶液（4.15.1)1mL，于100mL容量瓶中用甲醇（4.1）稀释至刻度，配制成香草酸、咖啡 酸、表儿茶素、芥子酸、阿魏酸、肉桂酸浓度为10.0pg/mL的混合标准储备液，-20℃以下避光保存.
4.15.3香草酸等6种多酚标准工作溶液：分别吸取一定量的混合标准储备液（4.15.2），用甲醇十水（4.8）稀释成浓度为0.50gg/L~400μg/L的标准工作溶液.现用现配.
5仪器
5.1液相色谱一串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）.5.4涡旋振荡器.5.6氮吹仪.5.7低温冰箱：温度可低至-20℃.5.8固相萃取柱：混合型璃阳离子交换固相萃取柱（60mg/3mL），或性能相当者.5.9微孔滤膜：0.22um，有机系.
5.2分析天平：感量士0.0001g.
5.3振荡器.
5.5固相萃取仪.
6取样和试样保存
6.1取样
取样按照GB/T5524的规定执行，实验室收到的样品应具有代表性，且在运输和储藏过程中未受到损害或变质.
6.2保存
试样于4C以下冰箱中避光保存.
7分析步骤
7.1试样的制备
称取约0.5g（精确至0.0001g）试样至10mL离心管中，然后加人5mL正已烷（4.4），涡旋1min混匀，储存在4C条件下，备用.
7.2净化
将混合型弱阳离子交换固相萃取柱放在固相萃取仪上，依次用5mL甲醇（4.1）和5mL正已烷（4.4）活化，控制流速1mL/min.将试样加人固相萃取柱中，用5mL60%异丙醇正已烷（4.7）淋洗，淋洗液弃去；再用5mL甲醇（4.1）加人到固相萃取柱中，用10mL离心管收集洗脱液.将洗脱液离心管置于氮吹仪上，水浴温度50℃，氮吹至近干，1mL甲醇水（4.8）复溶，涡旋30s后过0.22um滤膜，待测液.
7.3测定
7.3.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：Cu，柱长100mm，内径2.1mm，粒径3.0gm，或性能相当者；b）流动相：A为0.01%乙酸水（4.5），B为0.01%乙酸甲醇（4.6）；c)流速：0.20mL/min;d进样量：10L；
e）流动相梯度洗脱程序见表1.
表1流动相梯度洗脱程序
时间，min A.% B %0 7 95 75 25 512 55 4522 17 50 40 50 6028 5 9535 38 95 95 5 5
7.3.2质谱参考条件
a）离子源：电喷雾离子源：b） 扫描方式：负离子扫描；c）检测方式：选择离子监测（SRM）； 辅助气、鞘气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体；e）喷雾电压、碰撞能等参数应优化至最优灵敏度：f）监测离子对、碰撞能量和透镜电压等参数情况见表2.
表2香草酸、咖啡酸、表儿茶素、芥子酸、阿魏酸、肉桂酸定量离子参考质谱条件
化合物 保留时间.min 定量离子对，m/= 碰能量.eV 透镜电压.V香草酸 17.51 167/123 179/135 15 10 105 89表儿茶素 咖啡酸 18.00 18.53 289/245 20 122芥子酸 22.43 223/193 193/134 17 11 93 98阿镜酸 肉桂酸 22.27 28.18 147/103 5 92
7.3.3定性测定
在相同试验条件下，待测物在样品中的保留时间与标准工作溶液中的保留时间偏差在士2.5%之内，并且色谱图中各组分定性离子对的相对丰度，与浓度接近标准工作液中相应定性离子对的相对丰度 进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判断为样品中存在对应的待测物.
表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差
单位为百分率
相对离子丰度 >50 20~50（含） 10~20（含） <10允许的相对偏差 ±20 ±25 士30 ±50 7.3.4定量测定 取混合标准工作液与待测液交替进样，采用单点或多点校准，外标法定量.当样品的上机液浓度超过线性范围时，需稀释后测定.香草酸、咖啡酸、表儿茶素、芥子酸、阿魏酸、肉桂酸标准溶液的选择离子 监测色谱图参见附录A. 8结果计算 样品中多酚化合物含量以质量分数W计，单位为微克每千克（ug/kg），按式（1）计算. W=VxcxV
