NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T3296-2018
油菜籽中硫代葡萄糖苷的测定 液相色谱-串联质谱法
Determination ofglucosinolate poundsin rapeseeds-Liquid chromatography mass spectrometry
中华人民共和国农业农村部发布
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草
本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口.
本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业农村部油料产品质量安全风险评估实验室（武汉）、农业农村部油料及制品质量监督检验测试中心.
油菜籽中硫代葡萄糖苷的测定液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了采用高效液相色谱-串联质谱法测定油菜籽中硫代葡萄糖苷含量的方法.本标准适用于油菜籽中硫代葡萄糖苷含量的测定.
本标准方法油菜籽中硫代葡萄糖苷的检出限为0.1mol/g.
2规范性引用文件
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3方法原理
4试剂与材料
4.103-丁烯基硫代葡萄糖苷标准品：含量≥98.0%
4.114-羟基-3-呵噪甲基硫代葡萄糖苷标准品：含量≥98.0%.
4.124-戊烯基硫代葡萄糖苷标准品：含量≥98.0%.
4.133-时噪甲基硫代葡萄糖苷标准品：含量≥98.0%.
4.14苯乙基硫代葡萄糖苷标准品：含量≥98.0%
4.154-甲氧基-3-吲噪甲基硫代葡萄糖苷标准品：含量≥98.0%
4.161-甲氧基-3-号噪甲基硫代葡萄糖苷标准品：含量≥98.0%.
4.17甲醇-水混合溶液（7030）：量取70mL甲醇和30mL水混合.
NY/T32962018
4.18硫代葡萄糖苷单一标准储备溶液：分别称取标准品2-羟基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷、反式-2-羟基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷、丙烯基硫代葡萄糖苷、4-甲亚矾丁基硫代葡萄糖苷、2-羟基-4-戊烯基硫代葡萄糖苷、5-甲亚戊基硫代葡萄糖苷、3-丁烯基硫代葡萄糖苷、4-羟基-3-吲噪甲基硫代葡萄糖苷、4-戊烯基硫代葡萄糖苷、苯甲基（苄基）硫代葡萄糖苷、3-吲噪甲基硫代葡萄糖苷、苯乙基硫代葡萄糖 苷、4-甲氧基-3-吲噪甲基硫代葡萄糖苷、1-甲氧基-3-吲噪甲基硫代葡萄糖苷10.0mg（精确至0.1mg），用甲醇-水混合溶液（4.17）作溶剂溶解定容至10mL.此标准溶液浓度为1.0mg/mL.溶液转移至棕色玻璃瓶中后，在一20℃冰箱内保存，备用.
4.19内标溶液
4.19.15mmol/L丙烯基硫代葡萄糖苷内标溶液：精密称取207.70mg丙烯基硫代葡萄糖苷溶解于80mL水中，加水定容到100mL.
4.19.25mmol/L苯甲基硫代葡萄糖苷内标溶液：精密称取223.7mg苯甲基硫代葡萄糖苷溶解于80mL水中，加水定容到100mL.
注：用丙烯基硫代葡萄糖苷作为内标，当样品中含有丙烯基硫代葡萄糖苷时，用苯甲基硫代葡萄糖苷作内标.
4.20混合标准工作溶液：分别吸取2-羟基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷、反式-2-羟基-3-丁烯基硫代葡戊基硫代葡萄糖苷、3-丁烯基硫代葡萄糖苷、4-羟基-3-引哚甲基硫代葡萄糖苷、4-戊烯基硫代葡萄糖 萄糖苷、丙烯基硫代葡萄糖苷、4-甲亚碳丁基硫代葡萄糖苷、2-羟基-4-戊烯基硫代葡萄糖苷、5-甲亚矾苷、苯甲基（苄基）硫代葡萄糖苷、3-号噪甲基硫代葡萄糖苷、苯乙基硫代葡萄糖苷、4-甲氧基-3-吲噪甲基硫代葡萄糖苷、1-甲氧基-3-吲噪甲基硫代葡萄糖苷单一标准储备溶液（4.18）50L和内标标准工作溶液（4.20）50uL.用甲醇-水混合溶液（4.17）稀释至1ml，配制成混合标准工作溶液.
5仪器和设备
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）.5.2分析天平：感量士0.01mg和±0.1mg.5.3涡旋振荡器，5.4低温冰箱：温度可低至一20℃.5.6微孔滤膜：0.22gm，有机系. 5.5离心机：带有10mL转头，并能获得对应转速5000r/min的相对离心力.5.7棕色容量瓶：10mL和100ml.5.8离心管：10ml.5.9刻度试管：10mL.
6试样制备与保存
6.1试样制备
试样应在45℃条件下通风干燥，保证水分及挥发物含量不超过10%，按照GB5491的规定对试验材料进行缩分，将缩分后的实验材料分成三份，第一份按GB/T14489.1的规定测定水分及挥发物含量，第二份按GB/T14488.1的规定测定含油量，第三份为硫代葡萄糖苷待测试样.
将干燥待测试样在微型粉碎机中粉碎，过40目筛，然后立即连续完成7.1~7.2的全部过程.
6.2保存
试样于干燥器中保存.
7分析步骤
2
7.1称样
称取0.2g（精确至0.001g）试样至10mL离心管（5.8）中.
7.2硫代葡萄糖苷的提取
提取液甲醇-水混合溶液（4.17）预先在100C水浴中预热至沸腾.
立即加人200gL的5mmol/L内标溶液至离心管中.超声提取5min后，取出离心管，4500r/min离心 将装有试样的10mL离心管放于75C水浴1min，加人2mL沸腾后的甲醇-水混合溶液（4.17）后，3min，转移上清液至10mL刻度试管中.重复此提取操作一次，并将两次提取上清液合并至10mL试管（5.9）中.刻度试管至涡旋振荡器中混匀.提取上清液用微孔滤膜（5.6）过滤，待进样.
7.3空白试验
用相同的样品进行相同的前处理，但不加内标物质，以检查样品中内标物质是否存在.
7.4液相色谱-串联质谱测定
7.4.1液相色谱参考条件
色谱柱：UPLCCs（100流动相：A为水，B为甲醇：流速：0.20mL/min进样量：10; 柱温：30℃.
扫描方式：负离子扫描；检测方式：选择离子监测（SRM）.硫代葡萄糖苷定量离子和定性离子参考质谱条件见表2.
表2硫代萄萄糖苷定量离子和定性离子参考质谱条件
碰撞序号 分析物中文名称 分析物英文名称 定量离子对 能量 定性离子对 能量2-羟基-3-丁烯基硫代葡萄糖 Progoitrin 585-95-52 388.0/195. 0 eV 19 388.0/259.0 eV 202反式-2-羟基-3-丁烯基硫代葡萄糖件 Epiprogoitrn 19237-18-4388. 1/195.0 20 388. 1/259.0 19丙烯基硫代葡萄糖件 Sinigrin 3952- 98 - 5358. 1/195. 018358. 1/162. 0 18
