中华人民共和国农业行业标准
NY/T3513-2019
生乳中硫氰酸根的测定 离子色谱法
Determination of thiocyanate inraw milk-Ion chromatography
中华人民共和国农业农村部发布
前言
请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任. 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由农业农村部畜牧兽医局提出.本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274）归口.（北京）、农业农村部奶及奶制品质量监督检验测试中心（北京）. 本标准起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业农村部奶产品质量安全风险评估实验室
本标准主要起草人：文芳、叶巧燕、郑楠、李松励、王加启.
生乳中硫氰酸根的测定离子色谱法
1范围
本标准规定了生乳中硫氰酸根测定的离子色谱法.
本标准适用于牛、羊、水牛、耗牛等不同奶畜生乳中硫氰酸根的测定.
本标准的检出限为0.25mg/kg.定量限为0.75mg/k
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是 日期的版本适用于本文件.
3原理
试样用乙晴沉淀蛋白上 青液加水调节并经反相 相萃取样荐 普分高，电导检测器检测.以保留时间定性，外法定量.
4试剂或材料
4.6.1.2氢氧化钠淋 用水稀释至1000mL，可通人氮气保护，以减缓碱性 液（4 下可放置7d.
4.6.1.3氢氧化钠淋洗液（60 ：取3.12mL50%氢氧化钠 4.5），用水稀释至1000mL，可通人氮气保护，以减缓碱性淋洗液吸 习，室温下可放置7d.
4.6.2碳酸盐系淋洗液（NaCO浓度为5mmol/L.NnHCO浓度为2mmol/L.丙酮浓度为5%）：准确称取0.5300g碳酸钠和0.1680g碳酸氢钠，分别溶于适量水中，转移至1000mL容量瓶，加人50mL 丙酮，用水稀释定容，混匀.
4.7硫酸溶液（45mmol/L）：移取2.45mL浓硫酸，加人适量水中，并用水定容至1000mL，混匀.
4.8硫氰酸根标准储备溶液（1000mg/L)：将硫氰酸钠（NaSCN，CAS号：540-72-7，纯度≥99.99%）于80C烘箱内烘干2h.准确称取干燥后的硫氰酸钠0.1397g，用水定容至100mL，混匀.0℃~4℃保存，有效期为6个月.
4.9硫氰酸根标准中间溶液（10mg/L）：准确吸取1mL硫氰酸根标准储备液（4.8），用水稀释至100 mL，混匀.0℃C~4C保存，有效期为1个月.
4.10硫氰酸根标准系列溶液：分别准确移取硫氰酸根标准中间溶液（4.9）0gL、10gL、20gL50、
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mg/L、0.10mg/L.0.50mg/L和1.00mg/L的硫氰酸根标准工作液.0°C~4C保存，有效期为1个月. 100L、500gL和1000gL 用水定容至10mL，混匀，得到浓度分别为0mg/L、0.01mg/L0.02mg/L、0.05
5仪器设备
5.1离子色谱仪：配抑制器电导检测器.5.3天平：感量为0.1mg、0.01g. 5.2高速冷冻离心机：8000r/min.4℃.5.4涡旋混匀器.5.5移液器：100gL、1mL5.6烘箱：（80士5）℃.5.7过滤器：水系，0.22um.5.8反相净化小柱，如OnGuardIIRP柱（1.0mL），或性能相当者.
6样品
采集的有代表性生乳样品可用硬质玻璃瓶或聚乙烯瓶盛放，样品来集后应尽快分析.若样品在0℃C~6℃冷藏保存，冷藏时间不应超过48h；若不能及时测定，应于C冷冻保存，冷冻时间不应超过30d.解冻温度不应超过60℃，解冻次数不应超过5次.冷藏、冷冻的辉品需恢复至室温并摇匀，待测.
7试验步骤
7.1试样处理
称取试样4g（精确至0.01g）.用乙晴定容至10ml句1min，静置20min，离心5min.准确移取1.00mL上清液用水定容至10mL并混匀，备用~同时空白试验.
7.2提取液净化
将反相净化小柱依次用5mL甲醇和10永活化，静置30min，取上述溶液（7.1），过0.22μm滤膜并加载到活化好的净化反相柱上，弃去前3L流出液，收集滤液，待测.
7.3仪器参考条件
7.3.1仪器参考条件I
7.3.1.1色谱柱：以OH为流动相，并能使用梯度洗脱的、高容量的阴离子交换柱，如IonPacAS-16 型色谱柱（4mm×250mm爽lonPacAG-16型保护柱（4mm×50mm），或性能相当的离子色谐柱.7.3.1.2抑制器：ASRS-3004mm阴离子抑制器”，或性能相当的抑制器；外加水抑制模式，抑制器电流为112mA~149mA，外加水流量1.2mL/min.
7.3.1.3淋洗液：氢氧根系淋洗液（4.6.1），流速为1.0mL/min，梯度淋洗.梯度淋洗条件参见表1.
表1高子色谱仪淋洗液梯度淋洗条件（氢氧根体系）
序号 时间，min 流速.mL/min OH浓度，mmol/L1 2 13.1~18.0 0.0~13.0 1.00 1.00 45.0 60.018. 1~23. 0 1.00 45.0
7.3.1.6电导池温度：35℃.
7.3.1.4进样体积：100gL.
7.3.1.5柱温：30℃.
7.3.2仪器参考条件Ⅱ
7.3.2.1色谱柱：碳酸盐淋洗体系的高容量阴离子交换柱，如MetroscpAnionSupp5-150（4mm×150mm）阴离子交换色谱柱和MctroscpAnionGuurd（4mm×50mm）专用保护柱°，或性能相当的离子色谱柱.7.3.2.2抑制器：MSMⅡ型抑制器，抑制器再生液为硫酸溶液（4.7）.7.3.2.3淋洗液：碳酸盐系淋洗液（4.6.2)，流速为1.0mL/min.7.3.2.4进样体积：100guL 7.3.2.5柱温：30.0℃7.3.2.6电导池温度：40.0℃.
7.4标准系列溶液和试样溶液分析
按选定的仪器参考条件I或Ⅱ，对硫氰酸根标准系列溶液和试样溶液进行测定.不同淋洗液体系的标准溶液色谱图参见附录A.
7.5定性
酸根的保留时间一致，其相对偏差在土2.5%之内. 以硫氰酸根的保留时间定性，试样溶液中硫氰酸根的保留时间应专标准系列溶液（浓度相当）中硫氰
7.6定量
以硫氰酸根的浓度为横坐标、色谱峰面积（或峰高）为纵坐标，绘制标准曲线，其相关系数应不低于0.99.试样溶液中待测物的浓度应在标准曲线的线性态商内.如超出范围，应将试样溶液用水溶液稀释n倍后，重新测定.
8试验数据处理
试样中硫氰酸根的含量以质量浓度计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）计算.
.（1）
式中：
待测溶液火标准面线上查得硫氰酸根的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）：V- V:- 样品用乙晴提取时定容体积，单位为毫升（mL）；上清液稀释定容的体积，单位为毫升（mL）； 移取离心后上清液的体积，单位为毫升（mL）；试样质量，单位为克（g）；”--上机测定的试样溶液超出规定的范围后，进一步稀释的倍数.注：试样中测得的硫氰酸根离子含量乘以换算系数1.40，即得硫氟酸钠含量. 计算结果保留至小数点后2位，用2次平行测定的算术平均值表示.
9精密度
在重复性条件下，2次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10%.
