中华人民共和国农业行业标准
NY/T3903-2021
枸杞中黄酮类化合物的测定
Determination of flavonoids inLycium barbarum L.
中华人民共和国农业农村部发布
典通作的结构和起草规则》的规定本文件按照GB/T1.1-2020 准化工作导则第1部分起草.
本文件由农业农村部乡村产业发展司提出并归口.
本文件起草单位：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所（农业农村部构杞产品质量监督检验测试中心）中国农业科学院农产品加工研究所.
本文件主要起草人：王晓菁、吴燕、张锋锋、牛艳、李庆鹏、王彩艳、杨静、赵子丹、刘霞、陈翔、开建荣、李彩虹、石欣、王晓静.
枸杞中黄酮类化合物的测定
1范围
本文件规定了枸杞中总黄酮含量的分光光度计测定方法和枸杞中3种黄酮类化合物（见附录A）含量的高效液相色谱测定方法.
本文件适用于枸杞（包含干果、鲜果）中总黄酮及黄酮类化合物含量的测定.
2规范性引用文件
可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于 本（包括的修改单）适用于本文件.
3术语和定义
4原理
枸杞中的总 ROA 专铝盘生 加人氢氧化钠溶液后显色，在波长 比，通过与标准系 503nn 范时内，该 物的吸 CENT 总黄酮含量星正比收
5试剂与材料
除非另有说
5.1试剂
G5.1.1无水乙醇（C） 5.1.2亚硝酸钠（Na HAH CAS5.1.3硝酸铝[AI(NO）5.1.4氢氧化钠（NaOH.CA 310-73
5.2溶液配制
5.2.1乙醇溶液（73）：取70mL无水乙醇翔A30ml水中，搅拌均匀、备用.5.2.2乙醇溶液（37）：取30ml无水乙醇加入70mL水中，搅拌均匀、备用. 5.2.3亚硝酸钠溶液（50g/L）：准确称取5.00g亚硝酸钠于烧杯中，加适量水溶解，转入100ml.容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀、备用.5.2.4硝酸铝溶液（100g/L)：准确称取17.60g硝酸铝于烧杯中，加适量水溶解，转入100mL.容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀、备用.5.2.5氢氧化钠溶液（40g/L）：准确称取20.00g氢氧化钠于烧杯中，加适量水溶解，转入500ml.容量瓶中、用水定容至刻度，摇匀、备用.
5.3标准品
芦丁标准品（CHO，CAS号：153-18-4）：纯度≥98%.
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5.4标准溶液配制
芦丁标准储备液（1.00mg/mL）：准确称取芦丁标准品0.05g（精确至0.0001g），用乙醇溶液（5.2.1）溶解并定容至50.0ml.棕色容量瓶，摇匀.配制成1.00mg/ml.标准储备液.
6仪器与设备
6.1可见分光光度计.6.3水浴振荡器：振荡频率不低于240r/min. 6.2分析天平：感量0.0001g及0.01g.6.5涡旅混合器.6.6高速粉碎机：转速不低于10000r/min.6.7破壁机：转速不低于10000r/min.6.8比色Ⅲ：玻璃.
6.4离心机：转速不低于4000r/min.
7分析步骤
7.1试样制备
7.1.1构杞干果
去除枸杞中果柄等杂质，将样品置于-18C冷冻12h以上或液氮冷冻，取出后立即用高速粉碎机粉碎至枸杞中籽粒成粉末状，置于样品瓶中于一18C冷冻保存，备用.
7.1.2枸杞鲜果
去除枸杞中果柄等杂质，用破壁机匀浆，测定.
7.2试样提取
7.2.1枸杞干果
称取粉碎试样1g（精确至0.0001g）于50mL离心管中，加人20mL乙醇溶液（5.2.1）涡旋混匀1 min，在60C水浴200r/min振荡颗率下振荡提取30min后，于4000r/min离心5min，上清液转入 50.0mL容量瓶中，残渣用20ml.乙醇溶液（5.2.1）重复提取一次，合并上清液，冷却至室温后，定容至刻度.准确吸取上清液1.00ml于10ml离心管，加人4.00ml.无水乙醇，摇匀，静置5min，于4000r/min离心5min，将上清液转人10ml比色管中，待测.
7.2.2枸杞鲜果
称取浆状试样10g（精确至0.01g）于50ml.离心管中，其他提取步骤同7.2.1.
7.3标准曲线的绘制
0.50mL、0.60mL于10.0mL比色管中，加入4.00mL无水乙醇，摇匀，然后加入亚硝酸钠溶液（5.2.3）0.5ml摇匀：静置5min，加人硝酸铝溶液（5.2.4）0.5mL，摇匀；静置5min，加入氢氧化钠溶液（5.2.5）2.0ml.摇匀.最后用乙醇溶液（5.2.2）定容，得到浓度为0mg/L、5.0mg/L.、10.0mg/1.、20.0mg/L、 30.0mg/L、40.0mg/L、50.0mg/L.、60.0mg/L.的标准系列工作液，在波长508nm处测定吸光度.以芦丁质量浓度p（mg/L）为横坐标、相应的吸光度值A为纵坐标，绘制标准曲线，得到标准曲线回归方程.
7.4测定
将7.2.1、7.2.2待测液中加人亚硝酸钠溶液（5.2.3）0.5mL.摇匀：静置5min，加人硝酸铝溶液（5.2.4）0.5mL，摇匀：静置5min，加人氢氧化钠溶液（5.2.5）2.0mL，摇匀.最后用乙醇溶液（5.2.2）定 容至10.00mL.摇匀.试样于波长508nm处测定，以测得吸光值由标准曲线查得试样待测液中芦丁的含量.同时做空白试验.
7.5空白试验
分取1.00ml.乙醇溶液（5.2.1）于10.0ml.比色管中，加人4.00ml.无水乙醇，摇匀，其他步骤同7.4.
8结果计算
试样中总黄酮含量以芦丁的质量分数计、按公式（1）计算.
e-p）xVxV m×V×1000 （1）
式中：
试样中总黄酮含量的数值，单位为毫克每克（mg/g）；从标准曲线上查得试样待测液中总黄酮的质量浓度的数值，单位为毫克每升（mg/L）： 待测液中总黄制的质量流度的数值.单位为毫克每升（mg/L）：V 试样中加人并定容的提 从标准曲线上查得空 nL):V 试样的最终定 容体积试样的质量 的数V 计算结果保留 提取液分 3位 体 效家子TA
9精密度
在重复性条件
10其他
11原理
枸杞中的产 后，C柱分离，用紫外检测器在波 NTER
12试剂与材料
除非另有说明，在分价 中仅使用 中规 级水.
12.1试剂
12.1.2乙脂（CHCN.CAS号：75 色谱纯.
12.2溶液配制
甲醇溶液（73）：取70ml.甲醇加入30ml水中.混匀后备用.
12.3标准品
芦丁、山奈酚-3-O芸香糖苷和异鼠李-芸香糖苷（水仙苷）标准品，见附录A，纯度均≥98%.
12.4标准溶液配制
12.4.1芦丁标准储备液（1.00mg/mL）：准确称取芦丁标准品0.05g（精确至0.0001g），用甲醇溶解并
定容至50.0mL.棕色容量瓶，摇匀，配制成1.00mg/ml.标准储备液，避光0C~4C保存.12.4.2山奈酚-3-O-芸香糖苷标准储备液（1.00mg/ml）：准确称取山奈酯-3-O-芸香糖苷标准品0.05g （精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至50.0ml.棕色容量瓶，摇匀，配制成1.00mg/ml.标准储备液，避光0℃~4C保存.
