中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 1193-2003
基因检验实验室技术要求
General requirements for the laboratories for gene detection and identification
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标康由国家认证认可位营雪理委员会现出并购口.
本标车起享单位，国家质量监督检验检疫总局动植物检疫实经所、中华人民共和国深新出人境检验检疫局、中华人民共和国广州出人境检验检疫局、中华人民共和国江宁出人境验验检疫局.
本标主要起享人：朱水芳、陈红运、黄文胜，票文、章微明、青际期，
本标准系首次发布的检验检疫行业都座.
基因检验实验室技术要求
1范围
本标准规定了转基因产品检测实验室总体要求、质量控利和质量保证.
本标准适用于转蒸器产品检测实验宽的建设和质量控制，
下列术活定文和星略语适用于本标康，
2 1
#高 国J* genetie ally modified organisms GMOs;biotectnology modiied products
又呼生物我术产品，指用基四工程我术成者其他现代生物技术改变基组构或的动物、植物、微生物及其产品.
2.2
聚合酯链式反应polymerse chainreaction
聚合酶链式反应美称PCR，用一对事核苷酸引物.种瓶氧核糖模背限（NTPs）.在合适的温度、高子条件及财热DNA聚合辨组化下.在体外人工合成持异的换数DNA片段的过程.
2.3
实时贷光 PCRreal-time aoresceet PCR.kinetc PCR.bemigaeos PCR
池加了变光信号检测系，使得PCR扩增产物的持异性及数量检别与PCR扩增同步进行.实时光 在传统的PCR反应体系中-加人了扩增模版特异性的费光标记条交握针，同时在曾规的PCR仅上PCR报针有多种 常用的有分子齿标(melecular bescoe) Taqman 探针和杂交双球针等.
2. 4
dUTP-DNA措基化酶UNG UracDNA gcylax
一种持摄的DNA水新，它只水系有dUTP的DNA，此期防行朵的条什忌，在PCR扩增红程中用&UTP取代 dTTP：在PCR开始首用UNG募处理PCR扩增反应涨在城性条件下真遇（95C)断聚 DNA
2.5略语
2.5. 1PCR polymerse chin rewetiom，聚合链式及应两称 PCR 2. 5.2DNA deoxyribonucieic acid.脱氧模据披胶.2. 5. 3dNTP deoxyribonucleoside triphosphate-服航书甘级=确级 2. 5. 4 UNG; urseiHDNA glycosylasc-尿署或 DNA-糖基化册 2.5.6dTTP;deoxythymidine tuiphosphate 股氧病甘三级胶 .2. 5. 7dUTP:deoxyuridine triphospheme 脱氧联甘三磺酸 2. 5.8 bp: bese pair.i.基X.
3实验室总体要求
3.1基因检验实验室区端设置原则
增反应提合物配新和理区、理产物分折区，加最使用资光PCR仪，扩增区和增产物分析区可以 转基因产品检测实验室分为五个医开的工作区域：试剂贮存和准务区、种品粉端区、样品制备区、3合开.
转基因产品检得实验宝五个隔开的工作区城中每一区域都须有专是的仅器设备，
工作区城及各区城所用的仅器设备必须有明确的标记，避免不到工作区域内的武备、物品限用.
各区域实验台表面应可耐受次氧数销，双氧水等化学物质及索外线的消毒清洁作用.
3.1.1试到老存和准备区
本区的功能为：贮存试剂的制备、试列的分装和主反应温合液的别备.
汇存试用和用于样品制备的材科应直接运还主试剂肥存和准备区，不组经过产物分析区，试别原材料备须贮存在本区内，并在本区内别备或所需的贮存试则，当肥存试据雅液经检查可用后，应将其分 装肥存备用.
通常在实验室内一次厕定所需的矿增反应数来执定， 大多数用于扩增的试烈都应冰冻汇存.主肥存试则-应分装冰冻肥存.贮有试烈的分整体积程据
面报管，对于*热自动“战术，星会前色可不包含在主反应润合微中. 主反应混合额的题成战分光其是累合孵的适用性和稳定性通过预试验来检查：评价站是必须有书
3.1.2林品粉证区
本区的办露为：对样品进行粉碎.
祥品在此区粉碎，特梦到样品处理容香并加人适当林整挂提指液后，再进人样品别备区.
后，再进人种品制各区，将其余种品好存后送目种品制备区. C粉碎好的样品，在此区抽取所需松润用的试样，转够到样各此现容器并加人通当核服快提编液
老碎机要款置在特气岭防行染排作台上，每个样品要单独使用已御底消洗过的器目，
基在单独的房间进行，并且委远高其他操作区域，
3.1.3祥品制备区
本区的动能为：特检样品的保存，以服提取上存及其人至扩理反成管，
评价.别备好的样品模股安C底在超低服冰格中. 本处理对核胶扩增有很大影响，企须使用有效的被酸提取方法，可在开展检到前对握取方法送行
加人特测核就后，必级置好含反应据合班的及应管，开进人汉应扩增区， 本区可部分或全部设为正区条件，吴试剂肥存和准备区拿来的主区应混合报-在此区正压条件下
3.1.4扩地区
本区的研能为，DNA扩增，此外，已新备的DNA模板的加人和主反应氧合服（亲自试别忙存和制备区）制备成反应提合额等他可在本区内进行，在集式PCR调定中，通常在第一能扩增后必须打开反应管园此果式扩增有较高的行身危险性第二次排种必须在本区内选行.
3.1.5扩增产鲁分析区
本区的功能为：扩理片段的润定.
核服扩增后产物的分析方品多种多楼，加票上或微孔版上探针杂交方获（具位累务记或非同位累标记）.球国糖发胶电8、星丙然配族藏腔电冰、Souhern杂文、核账测序方法等.
在使用PCR-EL1SA方法检测扩港产物时，须使用驶板机洗板，
增产物从求区事最至首面区成的可载性 本区是最主要的扩增产物与桑来额.本区如采用负压条件或减压情况下（如安装排风期）可减少扩
3.2基因检验实验室工作人民操作医求
物配新和增区→扩理产物分折区.
不民的工区城使用不民服色的工作服，工作人民商开各工作区域时，不得将工作服管出.
实验室的赠济应指试剂肥存和准备区→扩理产物分析区的方向进行.不网的实稳区城应有其各自
实验操作过程中，操作者必须能手套，并经案更检，此外，换作中使用一次世帽子也是一个有微的防止为染的我惠，
严禁用嘴吸取液体，地样器和报头等必须经高压处理.在操作过程中要正确使用加杆各，避免有加科操中产生气用胶行用.
用过的加祥器吸头必须效人专门的须寿容器（含1%次氯酸的溶技）内，实验室卓榜表面每次工作后部要请结，含有PCR产物的任何应成必须收患罚1mol/L盐酸中，并且不能在实验室内领倒，王应 到远高PCR实验室的地方弃排.污染了PCR产物的吸头电必须政到1mol/L盐股中受思后再放到垃级装中按程乎公国（加黄经），
在样品轻师、制排、板航拍费等过程中出我实验材料整落或PCR产物外限时必须立即进行清链处现并香出记家，
工作结束后必须立街对工香区进行境结.
实验室及英设备的使用必须有目常记录.
3.3安全M护
装基因产品检撕实希室工作人员在整个实验操作注程中要载手套，在保光、有客射线环境工作时委熊防护骤统.前护服求采用其佳实全有放情饰：
3.4度高物处理
康弃物要进行高盖须后再微处题，有寿有客度物要经过除害再做处理，处理要符合环保要求.
3.5组果列断和验证
基因时，图进一步进行检测是否含有其他外源基因，用管属的PCR-电方接检别出样品为阳性时图 当一个排品间时教期出两个减周个以上外基因时，可判断为转基因产品阳性，当检到出一个务额进一步作验证实验，验证方法可适用实时费光PCR方法和样品品模酸杂交方法.
4反量控制与次量保证
4.1室内新量险制
4.1.1品的测试过程中的质量拉制
4.1.1.1样品别备
1. 75-2. 0 之网 常用260nm和280nm光密度的比值米检象神品核酸的纯度，纯的DNA，其OD/OD密该在
4.1.1.2附性控和期性质检
使用内标进对核脱的扩难进行我控，扩增检期的内标通靠为在是个细账周期中均匀表达的mRNA或者基个基四DNA片段，当样品中存在扩增持制物，减棋酸提取中发生DNA降多.或7og 大新，内标导会表现为别性结票.
控标本，与持厨特品等间处原益收校酸及扩带，以烈断护道检机历效果. 在测定转基因作物的GMO含量时应使用C知的低笔度的样品（数0.1%的转基因作物）作方蛋
品制备的整个过程中新带的空自管、仅有扩增反定被但不含扩增模板的及应管，润性押品等.这些质担 每一个PCR实验中群必家论有外加阴性质控（污染监测质控），闭性累控可包据如下儿种，即在标
