中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T
Protocol of the polymerase chain reaction for detecting genetically modified ponents in maize
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准由国家认证认可监督营理委员会提出并扫口. 本标座的附录A为资料性附录，本标准主要起草人，营际胡、明生、产行安、赵新，正秀券， 本标准起享单位，中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局.本标准系首衣发布的检验验疫行业标准.
玉米中转基因成分定性PCR 检测方法
1围
本标准规定了王米中转基因成分检验的推样、制排、PCR换测方继.
本标准的通选检据活用于玉采中转基因底分的定性检测.
本标准的蒸定椎期适用干玉米MON810.B11.Erent176 T14/T5.CBH351、GA21品系折高因成分的定性验测.
2益性烈用文件
下列文件中的条款通过本都准的引用面成为本标准的条款，凡是往明目期的引后文件-其随后别有的得改单（不包括我误的内容）双参订级均不适用于本标准-然面，最助极据本标准这或协议的各方研 究是否可使用这些文件的靠新版本，凡是不注目期的引用文件，其最额取本适用于本都准，
/SN/T124楼物及其加工产品中转基四成分实时荧光PCR定性验验方贵
3水语、定文和略绳语
下列求浴、定文和紧略福通用于本师准，
3. 1
特基因trpo
将物种本身不具有的，求票于其他物种的动能DNA序列，通过各种导人手改，使其在该物种中造行表达，以便谈物种额得新的品种特死，
3.2
聚合磁提式反应pelymriie cain rectio，简称 PCR
板基罚序列先经高温空性成为单桥，在DNA聚合酶作司和适宜的及应条件下-根账模板序列设计的河条引物分别与模板DNA两条链上相应的一我工补序具发生通面相互结合，提营在DNA聚合 酶的作用下以四种就氧核糖被酸（dNTP）为系物，使引物得以延养，然后不账重复交性、退火和延伴述一通巧，使就扩增的基因片我以儿何保数扩增，
最E'E
3. 3. 1 PCR;polymersm chain reaction /R If PCR 3.3. 2DNA，deoxyribonucltit acid-脱氧技糖板散.3. 3.3dNTP;deoxyribonureoside triphosyhate张其放世三确R. 3. 3. 4dATP，deoxyadeNOSine triphosphate 服氧B售三确级 3. 3.5dCTP:deoxgeytidine triphosphate B其BB三确R. 3. 3. 6dGTP deoxyguNOSine triphosphase.股氧与带三码股.3.3. 7dTTP;doosythymidinw triphoaphate.脱氧摘货三磷最 3. 3 8dUTP;deoxyuridine triphosphete脱氧尿甘三确
3. 3.9bpbese peir.诚孤对.3. 3. 10 EDTA ethylene diaminetetraacetic acid.Z二按四乙R. 3. 3. 11Teg: Thermsr aquetica 水生哲置 3. 3. 12Trintris(hydroxymthyL)eminomeute.三（是甲E)氨基甲级. 3. 3. 13 TE:Tris-CI EDTA B冲R.3.3. 14IVR，ierte 1 gme Irom maie.五米的转化醇 1 基. 3.3.15Ze五.术醇编蛋白基因.3.3. 18CaMV 35S.35S pmoter from iflower mosaic virus.自于花都菜花病春的 3SS 自 动子.3.3.17NPTII:neomycin-3'-phoshotransferase gene-新霉R-3′确股转建指基因. 3. 3. 18NO8; terminator of nopalne ayntaae gen.期明合成期基周此止子 3.3. 19IVS2;intron from the maine aleohol dehydrngenast gene.王术醇脱家脐基因的基因内区 2 3.3. 20PAT;phsphinothririn aoetyitransferase pne.草T降乙照移弱基因 3.3. 21HSP70 0 8 Kh incron from the kp70 geme (boat-ahock paonin) 京B热体克显白(Aup7U) 因的0.8K基因内区3. 3.22 CrylA(b): a synhetie gese eneodes the fiest 648 amino arids.ineeticideb-active ftruncoted product idrmtioal to that of Cry IA(B) gete ef Bacillas tharingieuis sobap苏云金常苑杆图杀毒蛋3. 3 23CDPK;calcium-dependent protein kinase(CDPK) grne 钙积额蛋白股期基因 自cryIA(e)基因.3. 3. 24 Cry9C insectieidal-active ftruncened product idesticel to that of CryeC gene of Baciller Aaringisir sub苏艺金劳指杆西总虫毒置白 CryC 基因.3.3. 25CaMV3SSI:35S terminator of CaMV grmcms 花椰菜花叶病等基显班的 3SS 将止于 3. 3. 26P artis 1 the promoter deriored from the rice (Orye arbe) actin 1 gre 8显于系求鼠蛋白1基因的能动子. 3. 3. 27OTPoptimieed transit peptide geme 优化迅输肽孤图 3. 3. 28miEPSPS;maiae 5-enolypymuvyishilkimate-3-phosphete syethase 来温于五东的#年眼股基乙
4污染指路
检过程中防业交又行鼎的牌施族际SN/T119中的民定执行.
5捕和荐
5.1抽特
按然SN/T 1194 中规定的方岳执行.
5.2特
移取约20g 玉米神晶经干热灭菌（150℃于热现处理2 h)或 120℃ 30 min 高压消毒处理的驱体或指啡机中确带至样品粉本要粒约0.5mm应右大小.
6定方法
6.1原腺
特形世扩地外源基四的DNA片版，级数PCR扩增结果，判断实样品中是否含有转基园成分. 样品经过提取DNA后针对转基因植物所插人的外原基因的基园序列设计引物，通过PCR技术，
6.2试别和材料
除另有规定外.其他试剂为分析线或生化试剂，水为投照GB/T6482规定的一级水.
6.2.1引物：检测转基因五未内、外基因的引物及其信意见表1.
表1检测转基因玉米内、外源基国所的引物德息
（/楼T） 引物列IVR AS 1'-igngmwgeemgaco-1 5'-gpgcnguagagaggat-3 58 内源多据任选其Zrin 1'goagomgrer3 171 S8CxMV 368 5′gtertscsutgcst F'pagreeemgegor!' 135 55GMV 358 '-ecttggeg}’ 1$ 55 资选检测 任选其NOS 'atgggrg F-mtagmgggr] 180 55NOS F'-icgttcecatggce-l’ 5'mgggga- 365 选控图NPTIE 5ggg- 1"-ggctegrgrgaeccn-3 183 56PAT 分 5'ggcemmceeseie-3” set 选控列BAR 5′-gaaccaactgggtat0-3’ 175 4IVS2/PAT 外 5'reggecgcsagtegw? 5′-mgagcaaggtarie-3 189 鉴定检列5"grgnguprggcanr-3 5’ngaggacguggsctctasg-3′ 66 签定检测 BT11/CaMVISS /0dSH 5′gttoctgcictem3′ 5'-stegesestgg!” 194 66 基定检测 MON831CrylA(b) CDPK/ 5'gngmngr!" 5′-etetegocgtmatgtteg° MONE31 基定检期CrylA(b) PAT/ 5'-agteggtogptpig-3 5'-eggggorgargoe-1' 定检关 176CaMV3SS1 CeMV355 外 5'-pgrgaartataguoco-3 5"-cmtegoasgocttencuna-3’ 229 5 TI4/T2CaMV35S/ /PAT 5′'agarcatoatnactetgregtg-3′ 5′-sgraagocttemmta-3’ 1 T1/TH 定检测CryC 5'gagngracg-3 379 CBH-351CMV3IS! CryIC/ 5'-nstacncguogcatig-3′ 5'arssmngp 1 371 55 CBH-351 定检测P aetin 1/ EPSPS 外 1'stgnmgoggu-3 5'-gagorogmategc-3 (0 55 定验务 GA21mEPSPS OTP/ 5'wraopeoagug-3 55 定检房 GA21
