T/NMRJ 内蒙古认证和检验检测协会团体标准
T/NMRJ 042-2026
乳制品中低聚果糖的测定液相色谱法
Determination of fructooligosaccharide in dairy products - Liquid chromatography
内蒙古认证和检验检测协会发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由由内蒙古自治区检验检测标准化技术委员会（SAM/TC61）归口.
本文件起草单位：内蒙古自治区产品质量检验研究院、内蒙古自治区食品质量安全检验检测科学研究院、内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司、准格尔旗市场监管检验检测信息中心、内蒙古自治区特 种设备检验研究院巴彦淳尔分院、锡林郭勒盟检验检测中心.
本文件主要起草人：高杨、冯淑艳、左国强、赵钢、鲁丽花、唐亚娟、贾爱媛、张冉昊、叶杉杉、高青云、和奕含、王海玉、杨辰、梁敏、乔奇、远刚、梁风玲、喻东威、韩雪、王涛、陈姝君、周鹭、 包明玥、赵昕、杨皓宇、卢军、王力群.
乳制品中低聚果糖的测定液相色谱法
1范围
本文件适用于乳制品中低聚果糖含量的测定. 本文件规定了乳制品中低聚果糖的液相色谱测定方法.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
试样中低聚果糖经50%乙腩溶液提取、离心，上清液进高效液相色谱仪，经氨基色谱柱分离，蒸发光散射检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量.
5试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水，
5.1试剂
5.1.1乙晴（CHsCN）：色谱纯.5.1.2冰乙酸（CH;COOH）
5.2.1乙酸水溶液（0.05%）：吸取冰乙酸0.5mL，加水定容至1000mL.5.2.250%乙晴水溶液：取等体积乙晴和水混匀，配制得50%乙溶液.
5.3标准品
5.3.1果果二糖（CzHzO，CAS号：470-58-6），纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.5.3.2果果三糖（CisHzOi6，CAS号：58208-59-6），纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证5.3.3果果四糖（CH4zO21，CAS号：58208-60-9），纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证 书的标准物质.书的标准物质.5.3.4果果五糖（CsuHsO26，CAS号：74903-83-6），纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证 书的标准物质.5.3.5果果六糖（CsHcOs1，CAS号：74914-46-8，纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书5.3.6果果七糖（C4HO3，CAS号：612838-82-1，纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书 的标准物质.的标准物质.
T/NMRJ 042-2026
5.3.7蔗果三糖（CisHO1s，CAS号：470-69-9，纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.5.3.8蔗果四糖（CHzO21，CAS号：13133-07-8，纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书 的标准物质.5.3.9蔗果五糖（CHO2s，CAS号：59432-60-9，纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书5.3.10蔗果六糖（C3sHsOs1，CAS号：62512-19-0，纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书 的标准物质.的标准物质.5.3.11蔗果七糖（C4zHzOs6，CAS号：62512-20-3，纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书5.3.12蔗果八糖（C4sHgO4，CAS号：62512-21-4，纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书 的标准物质.的标准物质.
5.4标准溶液配制
5.4.1果果二糖至果果七糖标准溶液：准确称取果果二糖至果果七糖标准品各1mg（精确到0.01mg）， 合并加水溶解并定容至1.0mL，得到浓度为1.0mg/mL的混合标准溶液，4C保存，有效期1个月.
5.4.2蔗果三糖至蔗果八糖混合标准溶液：准确称取蔗果三糖至蔗果九糖标准品2.5mg（精确到0.01mg），合并加水溶解并定容至1.0mL，得到浓度为2.5mg/mL的混合标准溶液4C保存，有效期1个月.
5.4.3低聚果糖混合标准使用液：取果果二糖至果果七糖、蔗果三糖至蔗果九糖配制为0.625mg/mL的使用液，4℃储存，临用现配.
5.5材料
微孔滤膜：0.22um，有机相.
6仪器和设备
6.1高效液相色谱仪：具有蒸发光散射检测器. 6.2旋涡混合器.6.3分析天平：感量为0.00001g、0.0001g、0.01g.6.5超声波清洗器：工作频率40kHz，功率500W.
6.4高速离心机：转速≥4000r/min.
7分析步骤
7.1试样制备及前处理
7.1.1液体乳：准确称取1g液体乳试样（精确到0.001g）于10mL离心管中，加入乙晴溶液（5.2.2）0.22um有机滤膜过滤后，滤液作为试样溶液备用. 并定容至10mL，涡旋混匀，超声提取15min，以不低于4000r/min的转速离心5min，取上清液，经
7.1.2乳粉：准确称取约0.5g奶粉试样（精确至0.0001g）于10mL离心管中，加入乙晴溶液（5.2.2）0.22um有机滤膜过滤后，滤液作为试样溶液备用. 并定容至10mL，涡旋混匀，超声提取15min，以不低于4000r/min的转速离心5min，取上清液，经
7.2仪器参考条件
7.2.1色谱柱：HILIC-Z，2.1×100mm，1.9μm，或相当者.7.2.2流速：0.4mL/min.7.2.4进样量：1μL. 7.2.3柱温：20℃.
7.2.7流动相：A相为0.05%乙酸水，B相为乙晴.梯度洗脱程序见表1.
7.2.5蒸发温度：65.0℃.
7.2.6气体流量：0.9L/min.
表1流动相洗脱参考梯度
时间（min） 0.0 流动相A% 15 流动相 B/% 8525.0 18.0 27 35 73 6530.0 15 85
7.3试样溶液的测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中.保留时间定性，峰面积定量，单点法得到试样溶液中各低聚果糖的浓度.根据试样溶液中被测低聚果糖的含量，选定浓度相近的标准工作溶液.标准工作溶液和试样 溶液中低聚果糖的响应值均应在仪器检测的线性范围内.各低聚果糖的色谱图见附录A中图A.1.
7.4空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行.
8分析结果的表述
试样中各低聚果糖的含量按式（1）计算：
(1）Amx1000
式中：
试样中各低聚果糖的含量：g/100g：c 试样溶液的定容体积，单位为毫升（mL）： 一标准工作液中各低聚果糖的浓度，单位为毫克每升（mg/mL）：-稀释倍数：Ais m- -试样的质量，单位为克（g）. 标准工作液中低聚果糖i的峰面积（或峰高）；A样液中低聚果糖的峰面积（或峰高）；100-换算系数
计算结果保留三位有效数字.
样品中低聚果糖含量按式（2）计算：
式中：
X样品中各种糖组分含量（以干基或干物质计），单位为克每百克（g/100g）. Xros低聚果糖含量（以干基或干物质计），单位为克每百克（g/100g）：计算结果保留一位小数.
9精密度
计算结果在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%.
10其他
当液体乳称样量为1g时，本方法定量限为0.5g/100g.
