中华人民共和国国家标准
GB 7918.5-87
Standard methods ofmicrobiologicalexamination for cosmeticsStaphylococcus aureus
中华人民共和国卫生部 发布
中华人民共和国国家标准
UDC 668.58:57685.07
化妆品微生物标准检验方法 金黄色葡萄球菌
GB7918.5-87
Standard methods of microbiologicalexamination for cosmeticsStaphylococus sureus
金黄色葡萄球菌在外界分布较广，抵抗力也较强，能引起人体局部化性病灶，严重时可导致败血症，因此化妆品中检验金黄色葡萄球菌有重要意义.
1方法提要
氏阴性细菌生长，丙酮酸钠可刺激金黄色葡萄球菌生长，以提高检出率，并利用分解甘露醇和血浆凝固 根据本菌特有的形态及培养特性，应用BairdParker平板进行分离，该平板中的氯化锂可抑制革兰酶等特征，以兹鉴别，
2培养基和试剂
2.1培养基
2.1.1SCDLP液体培养基
见GB7918.1-87《化妆品微生物标准检验方法总则》.
2.1.27.5%的氧化钠肉汤
成分：蛋白陈 10g牛肉膏 氧化钠 3g 75g蒸馆水 1000ml
制法：将上述成分加热溶解，调pH为7.4，分装，121C（151b）15min高压灭菌.
2.1.3Baird Parker 平板
成分：胰蛋白陈 牛肉膏 5g 10g醇母授膏 1g丙酮酸钠 10g氯化锂（LiCI6H O) 甘氨酸 12g琼脂 5g 20g蒸馏水 096pH7. 0±0. 2
增菌剂的配制：30%卵黄盐水50ml与除菌过滤的1%亚确酸钾溶液10ml混合，保存于冰箱内. 制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25C校正pH.分装每瓶95ml，121C高压
灭菌15min，临用时加热溶化琼脂，每95ml加入预热至50C的卵黄亚确酸钾增菌剂5ml，摇匀后倾注平板.培养基应是致密不透明的.使用前在冰箱储存不得超过48h.
2.1.4血琼脂培养基
成分：营养琼脂脱纤维羊血（或兔血） 100ml
制法：将营养琼脂加溶化，待冷至50C左右以无菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，制成平板，置冰箱内备用，
2.1.5甘露醇发酵培养基
成分：蛋白陈 10g氯化钠 5g甘露醇 10g0.2%澳磨香草酚蓝溶液 牛肉膏 5g 12ml蒸缩水 1000ml
制法：将蛋白陈、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH7.4，加入甘露醇和指示剂，混匀后分装试管中，115C（101b）20min灭菌备用.
2.1.6兔（人）血浆制备
取3.8%柠檬酸钠溶液（121C（15Ib）30min灭菌）1份加兔（人）全血4份，混匀静置，2000~3000r/min离心3~5min，血球下沉，取上面血浆.
3设备和材料
3.1显微镜.3.2培养箱.3.3离心机.3.4灭菌吸管：1ml，5ml，10ml. 3.5灭菌试管.3.6载玻片.3.7酒精灯.
4操作步骤
4.1增菌：取1：10稀释的样品10ml接种到90mlSCDLP液体培养基中（如无此培养基也可用7.5%氯化钠肉汤）.置37C培养箱，墙养24h.
注：如无此培养基也可用7.5%氯化销肉汤，检验含防属剂的化妆品时，可在1000ml此培养基中加1g卵磷脂、7g吐 80
4.2分离：自上述增菌培养液中，取1~2接种环，划线接种在BairdParker氏培养基，如无此培养基也可划线接种到血琼脂平板，置37C培养24~48h，在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周圈有溶血圈，在BairdParker氏堵养基上为圆形，光滑，凸起，湿润，直径为2~3mm， 颜色星灰色到色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明带.用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带.挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置37C培养24h.
成葡萄状，无芽胞，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小.直径约为0.5～1um. 4.3染色镜检：携取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检.金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列
4.4甘露醇发酵试验：取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，置37C培养24h，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸.
4.5血浆凝固酶试验
4.5.1玻片法：取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴灭菌生理盐水，另一端滴加一滴血浆，用接种环挑取待检菌落分别在生理盐水及血浆中充分研磨混合.血浆与菌苔混悬液在5min内出现团块或颗粒状 凝块时，而盐水滴仍量均匀混浊无凝固现象者为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性，凡玻片试验呈阴性反应或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验.
4.5.2试管法：吸取1：4新鲜血浆0.5ml，放入灭菌小试管中，再加入待检菌24h肉汤培养物0.5ml.混匀，放37℃温箱或水浴中，每半小时观察一次，2h之内如呈现凝块即为阳性.同时以已知血 浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5ml，分别加入灭菌小试管内0.5ml1：4血浆混匀，做为对照.
5检验结果报告
产酸，血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌. 凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇
附加说明：
本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所归口.本标准由化妆品微生物标准检验方法”起草小组起草.本标准主要起草人刘以贤.本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所负贵解释.
