中华人民共和国国家标准
GB/T22338-2008
Determination of multi-residues of chloramphenicolsin animal-original food
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准的附录A、附录B、附录C、附录D和附录E均为资料性附录.本标准由中华人民共和国质量监督检验检疫总局提出， 本标准由国家认证认可监督管理委员会归口.本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出入境检验检疫局.本标准主要起草人：邱月明、林黎明、李鹏、张鸿伟、赵海香、董益阳、蔡慧霞、谢孟峡、汪丽萍、孔莹.
动物源性食品中氯霉素类药物 残留量测定
1范围
本标准规定了动物源性食品中氯霉素类残留量的气相色谱-质谱和液相色谱-质谱/质谱测定方法.
本标准适用于水产品、畜禽产品和畜禽副产品中氯霉素、氟甲矾霉素和甲祺霉素残留的定性确证和定量测定.
2气相色谱-质谱法
2.1原理
样品用乙酸乙酯提取，4%氯化钠溶液和正己烷液-液分配净化，再经弗罗里硅土（Florisil）柱净化后，以甲苯为反应介质，用N，O双（三甲基硅基）三氟乙酰胺-三甲基氯硅烷（BSTFATMCS，991） 于70C硅烷化，用气相色谱/负化学电离源质谱测定，内标工作曲线法定量.
2.2试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和二次去离子水或相当纯度的水.2.2.1甲醇：色谱纯.2.2.2甲苯：农残级.2.2.3正已烷：农残级. 2.2.4乙酸乙酯.2.2.5乙醚.2.2.6氯化钠.2.2.7氯霉素（CAP）、氟甲霉素（FF）、甲矾霉素（TAP）标准物质：纯度≥99%.2.2.9氯化钠溶液（4%）：称取适量氯化纳用水配置成4%的氯化钠溶液，常湿保存，可使用1周. 2.2.8间硝基氯霉素（m-CAP）标准物质：纯度≥99%.2.2.10氯霉素类标准储备溶液：准确称取适量氯霉素、氟甲霉素和甲矾霉素标准物质（精确到0.1mg），以甲醇配制成浓度为100μg/mL的标准储备溶液.2.2.11间硝基氯霉素内标工作溶液：准确称取适量间硝基氯霉素标准物质（精确到0.1mg），用甲醇配制成10ng/mL的标准工作溶液.2.2.12氯霉素类基质标准工作溶液：选择不含氯霉素类的样品六份，分别添加1mL内标工作溶液 （2.2.11），用这六份提取液分别配成氯霉素、氟甲矾霉素和甲矾霉素浓度为0.1ng/mL、0.2ng/mL、1 ng/mL、2ng/mL、4ng/mL、8ng/mL的溶液，按本方法提取（2.4.1）、净化（2.4.2），制成样品提取液，用氨气缓慢吹干，硅烷化（2.4.3）后，制成标准工作溶液.2.2.13衍生化试剂：N，O双（三甲基硅基）三氟乙酰胺-三甲基氯硅烷（BSTFATMCS，991）.2.2.14固相萃取柱：弗罗里硅土柱（6.0mL.1.0g）.
2.3.1气相色谱/质谱联用仪：配有化学电离源（C1）.2.3.2组织搞碎机.
GB/T 22338-2008
2.3.3固相萃取装置.2.3.4振荡器.2.3.5旋转蒸发仪.2.3.6涡旋混合器. 2.3.7离心机.2.3.8恒湿箱.
2.4.1提取
（2.2.11）和30mL乙酸乙酯，振荡30min，于4000r/min离心2min，上层清液转移至圆底烧瓶中，残 称取10g（精确到0.01g）粉碎的组织样品于50mL具塞离心管中，加人1.0mL内标溶液渣用30mL乙酸乙酯再提取一次，合并提取液，35C旋转蒸发至1mL~2mL，待净化.
2.4.2净化
2.4.2.1液-液萃取
取，弃去正已烷层，水相用40mL乙酸乙酯分两次萃取，合并乙酸乙酯相于心形瓶中，35C旋转蒸发至 提取液浓缩物（2.4.1）加1mL甲醇溶解，用20mL氯化钠溶液（2.2.9）和20mL正已烷液-液萃近干，用氮气缓慢吹干.
2.4.2.2弗罗里硅土柱净化
弗罗里硅土柱依次用5mL甲醇、5mL甲醇-乙醚（37）溶液和5mL乙醚淋洗备用.将残渣（2.4.2.1）用5.0mL乙醚溶解上样，用5.0mL乙醚淋洗Florisil柱，5.0mL甲醇-乙醚溶液（37）洗脱，洗脱液用氮气缓慢吹干，待硅烷化.
2.4.3硅烷化
净化后的试样（2.4.2.2）用0.2mL甲苯溶解，加入0.1mL硅烷化试剂（2.2.13）混合，于70C衍生化60min.氮气缓慢吹干，用1.0mL正已烷定容，待测定.
2.4.4测定
2.4.4.1气相色谱-质谱条件
a）色谱柱：DB-5MS毛细管柱，30mX0.25mm（内径）×0.25μm，或与之相当者：b）色谱柱温度：50C保持1min，25C/min升至280C.保持5min;c）进样口温度：250C；d）进样方式：不分流进样，不分流时间0.75min；f）流速：1.0ml/min; e）载气：高纯氮气，纯度≥99.999%：g）进样量：1.0gl:h）接口温度：280C；i）离子源：化学电离源负离子模式NCI；j）扫描方式：选择离子监测；1）四级杆温度：106C； k）离子源温度：150C：m）反应气：甲烷，纯度≥99.999%；n）选择监测离子参见表1.
表1监测离子
药物名称 监测离子（m/z） 定量离子（m/z) 相对离子丰度比/% 允许相对误差/%466 100 ±20%间丽基氯霉素 468 470 466 66 16 ±30%432 2 ±50%466 468 100 71 ±20%氯霉素 376 466 32 ±25%378 339 100 19 ±30%341 75 ±20%氟甲霉素 429 339 89 ±20%409 431 100 84 ±20%甲雷素 411 409 93 ±20%501 499 92 93 ±20% ±20%
2.4.4.2定性测定
中，所选择的离子均出现，而且所选择离子的相对离子丰度比与标准物质一致，相对丰度允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的三种氯霉素.如果不能确证，应重新进样，以扫描方式（有足够灵敏度）或采用增加其他确证离子的方式来确证.
2.4.4.3内标工作曲线
用配制的基质标准工作溶液（2.2.12）按2.4.4.1的气相色谱-质谱条件分别进样，以标准溶液浓度为横坐标，待测组分与内标物的峰面积之比为纵坐标绘制内标工作曲线.
2.4.4.4定量
以m/z466（m-CAP和CAP）339（FF）和409（TAP）为定量离子，样品溶液中氯霉素类衍生物的响应值均应在仪器测定的线性范围内.在上述色谱条件下（2.4.4.1)，m-CAP、CAP、FF、TAP标准物质衍生物参考保留时间约为11.4min.11.8min、12.6min、13.6min.氯霉素类标准物质衍生物总离子流图和质谱图参见附录A中的图A.1和图A.2.
2.4.5平行实验
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定.
2.4.6空白实验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行.
2.5结果计算
结果按式（1)计算：
式中：
（-从内标标准工作曲线上得到的被测组分浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；
X试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（ug/kg）；
V-试样溶液定容体积，单位为毫升（mL)；
m-试样的质量，单位为克（g）.
