中华人民共和国国家标准
GB/T27577-2011
化妆品中维生素Bs（泛酸）及维生素原B5 (D-泛醇）的测定高效液相色谱紫外 检测法和高效液相色谱串联质谱法
Determination ofvitamin B(pantothenic acid）and provitamin B （D-fantothenol）)incosmetics-HPLC/UVandHPLCMS/MS
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准起草单位：大连市产品质量监督检验所（国家日化产品质量监督检验中心）、上海市日用化学工业研究所（国家香料香精化妆品质量监督检验中心）、大连标准检测技术研究中心.
本标准主要起草人：毛希琴、胡侠、潘炜、郑顺利、李鹏、李琼、
化妆品中维生素B（泛酸）及维生素原B （D-泛醇）的测定高效液相色谱紫外 检测法和高效液相色谱串联质谱法
1范围
本标准规定了化妆品中维生素B（泛酸）及维生素原B（D-泛醇）测定的高效液相色谱紫外检测法和高效液相色谱申联质谱法两种方法.
本标准适用于化妆品中维生素B（泛酸）及维生素原B（D-泛醇）的定量测定，高效液相色谱紫外检测法对泛酸，D-泛醇的检出限为30μg/g，定量限为100μg/g.高效液相色谱申联质谱法对泛酸、D-泛醇的检出限为30ng/g；定量限为 100ng/g-
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
其盐类（如泛酸钠及泛酸钙））和维生素原B（D-泛醇）均分布于水相，化妆品中油溶性成分易溶于有机 在水和与水不互溶的有机溶剂（如三氯甲烷或异辛烷等）形成的双液相体系中，维生素B（泛酸及相，面化妆品中的表面活性剂则富集于油水界面处.利用双液相体系可将维生素B，和维生素原B与化妆品中油溶性成分及表面活性剂初步分离，亚铁氰化钾-醋酸锌共沉淀剂去除提取液中的大分子基质.在酸性条件下将泛酸和D-泛醇富集于固相萃取C固定相上，脱除其他水溶性干扰物后，用40%甲醇水溶液洗脱，用反相高效液相色谱分离，紫外检测器或申联四级杆质谱检测，标准曲线外标法定量.
4试剂和材料
除非另有说明，所用水为GB/T6682中规定的一级水，
4.1标准物质英文名称、CAS号、分子式、分子结构式、相对分子质量、纯度见表1.
表1标准物质英文名称、CAS号、分子式、分子结构式、相对分子质量、纯度
化合物 英文名称 CAS号 分子式 分子结构式 相对分子 纯度名称 质量泛酸 pantothenie acid 79-83-4 C HNO; 219 23泛酸钠 sodium pantothenate 867-81-2 C H NNaO; 241.22%66<泛酸钙calcium pantothenate 137-08-6 CHCaN.O 476 53D-泛醇 D-panthenol 81-13-0 CHNO. 205.25 4.100.1mol/1甲酸：移取1.9mL甲酸（4.4），用水稀释定容至500mlL. 4.11醋酸锌溶液：称取21.9gCHO Zn2HO（分析纯），用0.2mol/L甲酸（4.9）溶解并定容至100 mL. 4.12亚铁氰化钾溶液：称取10.6gKFe（CN）.3HO（分析纯）.用水溶解并定容至100mL. （（9）由：（）由 4.1440%甲醇水溶液：甲醇（4.3）：蒸馏水体积比（23）. 4.15C固相萃取小柱：200mg/3mL.使用前，依次用3mL甲醇（4.3）、3ml蒸馏水进行活化. 4.16一次性针式样品过滤器：0.2um，尼龙膜. 4.17标准储备溶液：分别准确称取标准物质泛酸1.0g（或1.1g泛酸钠或者泛酸钙，折合为泛酸1.0g）和D-泛醇1.0g（以上质量均精确至0.1mg）.用蒸馏水溶解定容至25mL，配置成浓度为40mg/ml的标准储备液于4℃~6℃条件下保存. 4.18系列标准溶液A：首先将泛酸和D-泛醇标准储备液（4.17）等体积混合配置成泛酸和D-泛醇浓度均为20mg/mL的溶液，然后用蒸馏水稀释配置成泛酸和泛醇浓度均分别为1μg/mL、10μg/mL、50 μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、800μg/mL、1000μg/mL的系列标准混合溶液于4℃～6℃条件下保存（适用于高效液相色谐紫外检测法）. 4.19系列标准溶液B：用蒸馏水稀释泛酸和D-泛醇浓度均为100μg/mL的标准溶液（4.18），配置成泛酸和D-泛醇浓度均分别为1μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、400μg/L、800μg/L和1000pg/L的系列标准溶液于4℃C~6C条件下保存（适用于高效液相色谱申联质谱法）， 5仅器和设备 5.1高效液相色谱仪紫外检测器（高效液相色诺紫外检测法）.5.2高效液相色谱仪申联四级杆质谱（ESI源）高效液相色谱申联质谱法）.5.3分析天平：感量0.1mg，0.01mg.5.4氮吹仪.5.5装涡混合器. 5.6超声波清洗器.5.7离心机：转速不小于5000r/min，离心试管容量15mL5.8移液枪或移液器. 6试样制备 6.1化妆水、乳液、中性及弱油性膏霜等水易分散的化妆品样品的制备 称取0.2g样品（精确至0.01g）于15mL具塞塑料离心管中，50℃条件下氮吹，尽量除去样品中的水分.向离心管中加人3.6mL0.1mol/L甲酸（4.10）及200gL醋酸锌溶液（4.11)，涡旋混合使样品氯甲烷（4.6），涡庭混合2min.然后于5000r/min离心5min~20min. 均匀分散，然后向溶液中准确添加200gL.亚铁氰化钾溶液（4.12），震荡摇匀，向离心管中加入3mL三 准确移取2mL上层溶液过C固相萃取小柱（4.15），1mL0.1mol/L甲酸（4.10）淋洗柱床后，在小柱出口处放置2mL小试剂瓶，准确添加1mL40%甲醇水溶液（4.14）淋洗柱床，收集流出溶液，涡旋混合待测. 6.2油性膏霜、油剂类化妆品等水不易分散的化妆品样品的制备 称取0.2g样品（精确至0.01g）于15mL具塞塑料离心管中，先向离心管中加人2mL三氯甲烷（4.6），涡旋混合至样品均匀分散后，再向离心管中准确加人3.6mL0.1mol/L甲酸（4.10）及200L醋酸锌溶液（4.11），涡旋混合2min后，继续向离心管中准确加入200gL亚铁氰化钾溶液（4.12），涡旋 混合后，于5 000r/min离心5min~20 min， 余下步骤与6.1相同. 6.3唇膏、唇彩、发蜡等蜡基化妆品样品的制备 （4.8），涡旋，若样品不能够完全分散，需将离心管置于80C水浴中5min，待样品完全融化后，向离心 称取0.2g样品（精确至0.01g）于15mL具塞塑料离心管中，向离心管中加人2mL异辛烷管中准确加人3.6mL0.1mol/L甲酸（4.10）（80C水浴预热）及200pL醋酸锌溶液（4.11），涡旋1min后.将离心管重新置于80C水溶平衡5min.取出再涡旋1min.待冷却后，向溶液中准确添加200L亚铁氰化钾溶液（4.12）及2mL三氯甲烷（4.6），震荡摇匀，必要时于5000r/min离心5min~ 20min.若样品能够完全分散，则无需水浴加热，直接向离心管中准确加人3.6mL0.1mol/L甲酸（4.10)（80C水溶预热）及200gl醋酸锌溶液（4.11)，涡旋2min，然后向溶液中准确添加200yL亚铁氰化钾溶液（4.12），涡旋混合.必要时于5000r/min离心5min~20min. 余下步骤与6.1相同. 6.4指甲油样品的制备 称取0.2g样品（精确至0.01g）于15mL具塞塑料离心管中，向离心管中加人2mL乙酸丁酯-三
