中华人民共和国国家标准
GB 5009.111-2026
食品安全国家标准
食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍 生物的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准代替GB5009.111-2016（食品安全国家标准食品中脱氧雪腐刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》.
与GB5009.111-2016相比，主要技术变化如下： 修改了方法的适用范围：增加了液相色谱法对乙酰化衍生物的测定；剩除了薄层色谱测定法.
食品安全国家标准
食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍 生物的测定
1范围
本标准规定了食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定方法.
本标准第一法液相色谱法适用于食品（除婴幼儿谷类辅助食品外）中脱氧雪腐刀菌烯醇、3-乙酰
本标准第二法液相色谱-质谱/质谱法适用于食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐刀菌烯醇和15-乙酰脱氧雪腐刀菌烯醇的测定.
本标准第三法酶联免疫吸附法适用于谷物及其制品中脱氧雪腐刀菌烯醇的筛查测定.
第一法液相色谱法
2原理
法定量. 试样经乙晴-水溶液提取，免疫亲和柱净化，液相色谱-紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1甲醇（CH OH).3.1.3氯化钠（NaCl）. 3.1.2乙晴（CHCN）：色谱纯.3.1.4磷酸氢二钠（NaHPO)（或十二水磷酸氢二钠，NaHPO12HO）.3.1.5磷酸二氢钾（KHPO，）.3.1.6氯化钾（KCl）.3.1.7盐酸（HCI).3.1.9吐温-20（CHO）. 3.1.8氢氧化钠（NaOH）.3.1.10乙晴（CHCN).
3.2试剂配制
3.2.180%乙晴溶液：量取20mL水，用乙晴稀释至100mL，混匀.
3.2.21mol/L盐酸溶液：量取8.3mL盐酸倒入90mL水中，混匀后加水至100mL.3.2.31mol/L氢氧化钠溶液：称取4.0g氢氧化钠，用100mL水溶解，混匀.3.2.4磷酸盐缓冲溶液（PBS）：称取8.00g氯化钠、1.20g磷酸氢二钠（或3.02g十二水磷酸氢二钠）、0.20g磷酸二氢钾、0.20g氯化钾，用900mL水溶解，使用1mol/L盐酸溶液调节pH至与免疫亲和柱相匹配，加水定容至1000mL，混匀.
3.2.5磷酸盐-吐温-20缓冲液（PBST）：称取1g吐温-20，用磷酸盐缓冲液定容至1000mL.
3.3标准品
3.3.1脱氧雪腐刀菌烯醇（DON，CHO，CAS号：51481-10-8）：纯度≥99%的标准品或其溶液.其溶液.3.3.315-乙酰脱氧雪腐刀菌烯醇（15-ADON，CHO，CAS号：88337-96-6）：纯度≥99%的标准品或其溶液，
3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备液（100μg/mL):称取DON3-ADON和15-ADON各1mg（精确至0.01mg)，分别用3.4.2混合标准工作液（10μg/mL）：吸取DON、3-ADON和15-ADON标准储备液（100μg/mL）各 乙晴溶解并定容至10mL.一18℃及以下温度避光保存，有效期12个月.1.00mL，用乙睛稀释并定容至10mL.-18℃及以下温度避光保存，有效期6个月.100ng/mL、200ng/mL500ng/mlL、1 000ng/mlL.1500ng/mL的标准系列工作液.临用现配.
3.5材料
3.5.1微孔滤膜：孔径0.45gm，有机型.或相当者.3.5.2免疫亲和柱：脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物柱容量≥1000ng，脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物柱回收率≥85%.
4仪器和设备
4.1液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器.4.2电子天平：感量0.1g、0.01g和0.01mg. 4.3高速粉碎机.4.4组织接碎机.4.5匀浆机.4.6涡旋振荡器：转速≥1 000r/min. 4.7氮吹仪.4.8离心机；转速≥6000r/min.
5分析步骤
5.1试样制备与保存
5.1.1试样制备
检测用的样品量应大于1kg：当样品量不足1kg时，至少取同一批次的3个包装；缩分后取不低于2
0.5kg、其中，固体样品用高速粉碎机粉碎，半固体样品用组织捣碎机捣碎，液体样品用匀浆机匀浆. 注1：对于高油脂含量颗粒样品、柔韧性样品、高黏度样品、高糖样品等特殊样品可以采取冷冻等措施进行制样.注2：对于碳酸饮料或酒类等，可采取超声、搅拌或抽真空等措施脱气后混匀.注3：根据检验目的可按实际情况取样制备.
5.1.2试样保存
制备后混合均匀的样品均分至约100g的多个包装储存于活净的容器内，密封后根据样品性质置于2℃~6℃或-18℃及以下避光保存.
5.2试样提取
5.2.1固体、半固体试样
称取试样5g（精确到0.01g）于50mL离心管中，加20mL80%乙晴溶液，混匀，置于涡旋振荡器提取20min，6000r/min离心10min，取上清液A备用.
5.2.2液体试样
酱油、醋：称取试样5g（精确到0.01g）于50mL离心管中，加水至25mL，混匀，置于涡旋振荡器提取 20 min，6 000r/min离心10 min，取上清液B备用.
其他液体试样：称取试样20g（精确到0.1g）于50mL离心管中，加水至25mL，混匀，置于涡旋振荡器提取20min，6000r/min下离心10min，取上清液C备用.
5.3试样净化
准确移取2.0mL上清液A或5.0mL上清液B或5.0mL上清液C，加人PBST溶液至50mL（醋等酸性样品需先用氢氧化钠溶液调节pH至6~8），混匀，若产生析出物需6000r/min离心5min.
待免疫亲和柱恢复至室温原有液体流尽后，以约1滴/s的流速将待净化的稀释液全部通过免疫体.加人2mL甲醇至亲和柱内进行洗脱.收集洗脱液，在50C下用氮气缓缓吹干，加人1.0mL初始 亲和柱.稀释液流尽后依次用5mLPBS溶液、5mL水淋洗，弃去全部流出液，抽干亲和柱内的残余液流动相，涡旋混合30s溶解残留物.0.45μm滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中，待测.
注1：使用不同厂商的免疫亲和柱，在样品上样、淋洗和洗脱的操作方面可能会略有不同，应按照供应商所提供的操
作说明书要求进行操作.
注2：全自动（在线）或半自动（离线）的净化仪器可优化操作参数后使用.
5.4液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
a）色谱柱：C柱（柱长250mm.内径4.6mm：填料粒径5pm），或等效柱；（9c）流动相：A相：水，B相：色谱纯乙晴，梯度洗脱程序见表1；d）流速：1.2mL/min; e）检测波长：218nm；f）进样量：50pl.
